產(chǎn)品編號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品包裝 |
產(chǎn)品價(jià)格 |
D2703-1μg |
pCMV-N-CFP (青色熒光蛋白) |
1μg |
888.00元 |
??????pCMV-N-CFP是碧云天自行研發(fā)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)質(zhì)粒,用于表達(dá)N端含CFP(Cyan Fluorescent Protein, 青色熒光蛋白)標(biāo)簽的融合蛋白。該質(zhì)粒含有CMV啟動(dòng)子,可以高效啟動(dòng)目的蛋白在細(xì)胞中的表達(dá)。在多克隆位點(diǎn)的前面有一個(gè)CFP的完整編碼序列,因此在多克隆位點(diǎn)根據(jù)閱讀框插入目的基因就可以表達(dá)N端含有CFP標(biāo)簽的融合蛋白。利用CFP的熒光特性可以比較容易地觀察融合蛋白的表達(dá)量和細(xì)胞內(nèi)定位,也可以利用CFP抗體來(lái)檢測(cè)或免疫沉淀融合蛋白。CFP與GFP高度相似,可以嘗試用GFP抗體檢測(cè)CFP。該質(zhì)粒為卡那霉素抗性。轉(zhuǎn)染細(xì)胞后,可以使用G418篩選穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株。
??????pCMV-N-CFP質(zhì)粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide
|
Position
|
CMV promoter
|
1-602
|
T3 promoter and T3 primer binding site
|
620-639
|
CFP
|
677-1393
|
Multiple cloning site
|
1394-1483
|
T7 promoter and T7 primer binding site
|
1503-1524
|
SV40 polyA signal
|
1536-1919
|
f1 origin of ss-DNA replication
|
2057-2363
|
bla promoter
|
2388-2512
|
SV40 promoter
|
2532-2870
|
Neomycin/kanamycin resistance ORF
|
2905-3696
|
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal
|
3697-4155
|
pUC origin
|
4284-4951
|
??????
pCMV-N-CFP質(zhì)粒(5003bp)的圖譜如下:
??????pCMV-N-CFP的多克隆位點(diǎn)的詳細(xì)圖譜如下:
SacICFP
|
|
651
|
GAGCTCTAGC
|
GCTACCGGTC
|
|
TGAGCAAGGG
|
|
|
|
CTCGAGATCG?
|
CGATGGCCAG?
|
|
ACTCGTTCCC?
|
|
|
701
|
TTCACCGGGG?
|
TGGTGCCCAT?
|
CCTGGTCGAG?
|
CTGGACGGCG?
|
|
|
|
AAGTGGCCCC?
|
ACCACGGGTA?
|
GGACCAGCTC?
|
GACCTGCCGC
|
|
|
751
|
CCACAGGTTC?
|
AGCGTGTCCG?
|
GCGAGGGCGA?
|
GGGCGATGCC?
|
|
|
|
GGTGTCCAAG?
|
TCGCACAGGC?
|
CGCTCCCGCT
|
CCCGCTACGG
|
|
|
801
|
AGCTGACCCT
|
GAAGTTCATC?
|
TGCACCACCG?
|
GCAAGCTGCC?
|
|
|
|
TCGACTGGGA?
|
CTTCAAGTAG?
|
ACGTGGTGGC
|
CGTTCGACGG?
|
|
|
851
|
CCCACCCTCG?
|
TGACCACCCT?
|
GACCTGGGGC?
|
GTGCAGTGCT?
|
|
|
|
GGGTGGGAGC
|
ACTGGTGGGA
|
CTGGACCCCG?
|
CAGGTCACGA
|
|
|
901
|
CCCCGACCAC?
|
ATGAAGCAGC?
|
ACGACTTCTT?
|
CAAGTCCGCC?
|
|
|
|
GGGGCTGGTG?
|
TACTTCGTCG?
|
TGCTGAAGAA
|
GTTCAGGCGG?
|
|
|
951
|
GCTACGTCCA
|
GGAGCGTACC?
|
ATCTTCTTCA?
|
AGGACGACGG
|
|
|
|
GCTACGTCCA?
|
GGAGCGTACC?
|
ATCTTCTTCA?
|
AGGACGACGG?
|
|
|
1001
|
ACCCGCGCCG?
|
AGGTGAAGTT?
|
CGAGGGCGAC?
|
ACCCTGGTGA?
|
|
|
|
TGGGCGCGGC?
|
TCCACTTCAA?
|
GCTCCCGCTG?
|
TGGGACCACT?
|
|
|
1051
|
GCTGAAGGGC?
|
ATCGACTTCA?
|
AGGAGGACGG?
|
CAACATCCTG?
|
|
|
|
CGACTTCCCG?
|
TAGCTGAAGT?
|
TCCTCCTGCC?
|
GTTGTAGGAC?
|
|
|
1101
|
TGGAGTACAA?
|
CTACATCAGC?
|
CACAACGTCT?
|
ATATCACCGC?
|
|
|
|
ACCTCATGTT?
|
GATGTAGTCG?
|
GTGTTGCAGA
|
TATAGTGGCG?
|
|
|
1151
|
AAGAACGGCA?
|
TCAAGGCCCA?
|
CTTCAAGATC?
|
CGCCACAACA?
|
|
|
|
TTCTTGCCGT
|
AGTTCCGGGT?
|
GAAGTTCTAG?
|
GCGGTGTTGT?
|
|
|
1201
|
CAGCGTGCAG?
|
CTCGCCGACC?
|
ACTACCAGCA?
|
GAACACCCCC?
|
|
|
|
GTCGCACGTC?
|
GAGCGGCTGG?
|
TGATGGTCGT?
|
CTTGTGGGGG?
|
|
|
1251
|
GCCCCGTGCT?
|
GCTGCCCGAC?
|
AACCACTACC?
|
TGAGCACCCA?
|
|
|
|
CGGGGCACGA?
|
CGACGGGCTG?
|
TTGGTGATGG?
|
ACTCGTGGGT?
|
|
|
1301
|
AGCAAAGACC?
|
CCAACGAGAA?
|
GCGCGATCAC?
|
ATGGTCCTGC?
|
|
|
|
TCGTTTCTGG?
|
GGTTGCTCTT?
|
CGCGCTAGTG?
|
TACCAGGACG?
|
|
|
BamHI HindIII
|
|
1351
|
GACCGCCGCC?
|
GGGATCACTC?
|
TCGGCATGGA?
|
CGAGCTGTAC?
|
|
|
|
CTGGCGGCGG?
|
CCCTAGTGAG?
|
AGCCGTACCT?
|
GCTCGACATG?
|
|
|
PstI EcoRI EcoRV SalI BglII XhoI XbaI SpeI
|
1401
|
AGCTTCTGCA
|
GGAATTCGAT
|
ATCGTCGACA
|
GATCTCTCGA
|
GTCTAGAACT
|
|
TCGAAGACGT
|
CCTTAAGCTA
|
TAGCAGCTGT
|
CTAGAGAGCT
|
CAGATCTTGA
|
ApaI
|
1451
|
AGTGGGCCCG
|
GTACCTTAAT
|
TAATTAAGGT
|
ACC
|
|
|
TCACCCGGGC
|
CATGGAATTA
|
ATTAATTCCA
|
TGG
|
|
??????pCMV-N-CFP中沒(méi)有的酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-CFP)包括:
AclI
|
AflII
|
AhdI
|
AscI
|
AsiSI
|
BaeI
|
BbvCI
|
BlpI
|
BsmBI
|
BsiWI
|
BsmBI
|
BspEI
|
BssHII
|
BstEII
|
BstXI
|
BstZ17I
|
EarI
|
EcoNI
|
NotI
|
NruI
|
PflMI
|
PmeI
|
PmlI
|
PpuMI
|
PspXI
|
SacII
|
SapI
|
SbfI
|
ScaI
|
SgrAI
|
SwaI
|
TspMI
|
XcmI
|
XmaI
|
XmnI
|
|
??????pCMV-N-CFP中的單酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that cut pCMV-N-CFP once)包括:
NdeI
|
CA`TA,TG
|
240
|
|
ApaI
|
G,GGCC`C
|
1454
|
SnaBI
|
TAC|GTA
|
346
|
|
PvuI
|
CG,AT`CG
|
1534
|
CspCI
|
,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN`
|
382
|
|
BclI
|
T`GATC,A
|
1690
|
NheI
|
G`CTAG,C
|
597
|
|
MfeI
|
C`AATT,G
|
1783
|
BmtI
|
G,CTAG`C
|
597
|
|
HpaI
|
GTT|AAC
|
1796
|
SacI
|
G,AGCT`C
|
651
|
|
MluI
|
A`CGCG,T
|
1919
|
Eco53kI
|
GAG|CTC
|
653
|
|
BsaXI
|
,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN`
|
2080
|
AfeI
|
AGC|GCT
|
660
|
|
DraIII
|
CAC,NNN`GTG`
|
2146
|
AgeI
|
A`CCGG,T
|
664
|
|
SfiI
|
GGCCN,NNN`NGGCC
|
2805
|
BcgI
|
,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN`
|
765
|
|
StuI
|
AGG|CCT
|
2854
|
BsrGI
|
T`GTAC,A
|
1386
|
|
ClaI
|
AT`CG,AT
|
2873
|
BamHI
|
G`GATC,C
|
1394
|
|
BspDI
|
AT`CG,AT
|
2873
|
HindIII
|
A`AGCT,T
|
1400
|
|
EagI
|
C`GGCC,G
|
2939
|
PstI
|
C,TGCA`G
|
1406
|
|
KasI
|
G`GCGC,C
|
3032
|
EcoRI
|
G`AATT,C
|
1412
|
|
PluTI
|
G,GCGC`C
|
3032
|
EcoRV
|
GAT|ATC
|
1420
|
|
NarI
|
GG`CG,CC
|
3033
|
SalI
|
G`TCGA,C
|
1424
|
|
SfoI
|
GGC|GCC
|
3034
|
AccI
|
GT`MK,AC
|
1425
|
|
MscI
|
TGG|CCA
|
3115
|
BglII
|
A`GATC,T
|
1430
|
|
PflFI
|
GACN`N,NGTC
|
3151
|
BsoBI
|
C`YCGR,G
|
1436
|
|
Tth111I
|
GACN`N,NGTC
|
3151
|
PaeR7I
|
C`TCGA,G
|
1436
|
|
BsrDI
|
GCAATG,NN`
|
3264
|
AvaI
|
C`YCGR,G
|
1436
|
|
RsrII
|
CG`GWC,CG
|
3549
|
XhoI
|
C`TCGA,G
|
1436
|
|
BstBI
|
TT`CG,AA
|
3715
|
XbaI
|
T`CTAG,A
|
1442
|
|
BsaI
|
GGTCTCN`NNNN,
|
4022
|
SpeI
|
A`CTAG,T
|
1448
|
|
ApaLI
|
G`TGCA,C
|
4637
|
PspOMI
|
G`GGCC,C
|
1454
|
|
??????pCMV-N-CFP質(zhì)粒中推薦使用的測(cè)序引物序列如下:
??????N-CFP primer (1284-1303): 5′-GCACCCAGTCCGCCCTGAGC-3′
??????T7 primer (1503-1524): 5′-GTAATACGACTCACTATAGGGC-3′
??????pCMV-N-CFP的全序列信息:D2703 pCMV-N-CFP-seq.txt
??????pCMV-N-CFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后的表達(dá)效果請(qǐng)參考圖1。
圖1. pCMV-N-CFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后的表達(dá)效果圖。左側(cè)為明場(chǎng)照片,右側(cè)為熒光照片。
包裝清單:
產(chǎn)品編號(hào)
|
產(chǎn)品名稱
|
包裝
|
D2703-1μg
|
pCMV-N-CFP (青色熒光蛋白)
|
1μg
|
D2703-100μg
|
pCMV-N-CFP (青色熒光蛋白)
|
100μg
|
—
|
說(shuō)明書
|
1份
|
保存條件:
??????-20℃保存。
注意事項(xiàng):
??????本質(zhì)粒未經(jīng)碧云天書面許可不得用于任何商業(yè)用途,也不得移交給訂貨人所在實(shí)驗(yàn)室外的任何個(gè)人或單位。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。