| 產(chǎn)品編號 |
產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品包裝 |
產(chǎn)品價(jià)格 |
| D2705-100μg |
pCMV-N-DsRed (紅色熒光蛋白) |
100μg |
1086.00元 |
??????pCMV-N-DsRed是碧云天自行研發(fā)的哺乳動物細(xì)胞表達(dá)質(zhì)粒，用于表達(dá)N端含DsRed (Discosoma sp. red fluorescent protein，香菇珊瑚紅色熒光蛋白)標(biāo)簽的融合蛋白。該質(zhì)粒含有CMV啟動子，可以高效啟動目的蛋白在細(xì)胞中的表達(dá)。在多克隆位點(diǎn)的前面有一個DsRed的完整編碼序列，并且在DsRed前面加入Kozak序列，因此在多克隆位點(diǎn)根據(jù)閱讀框插入目的基因就可以表達(dá)N端含有DsRed標(biāo)簽的融合蛋白。利用DsRed的熒光特性可以比較容易地觀察融合蛋白的表達(dá)水平和細(xì)胞內(nèi)定位，也可以利用DsRed抗體來檢測或免疫沉淀融合蛋白。DsRed與GFP沒有序列同源性，不能使用GFP抗體檢測DsRed。該質(zhì)粒為卡那霉素抗性。轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，可使用G418篩選穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株。
??????pCMV-N-DsRed質(zhì)粒的主要信息如下：
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Feature Nucleotide
|
Position
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|
CMV promoter
|
1-602
|
|
T3 promoter and T3 primer binding site
|
620-639
|
|
Kozak sepuence
|
656-662
|
|
DsRed
|
663-1337
|
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Multiple cloning site
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1338-1403
|
|
T7 promoter and T7 primer binding site
|
1446-1468
|
|
SV40 polyA signal
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1481-1863
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f1 origin of ss-DNA replication
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2001-2307
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bla promoter
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2332-2451
|
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SV40 promoter
|
2476-2814
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|
Neomycin/kanamycin resistance ORF
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2849-3641
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|
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal
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3642-4099
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pUC origin
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4226-4892
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??????pCMV-N-DsRed質(zhì)粒(4947bp)的圖譜如下：
??????pCMV-N-DsRed的多克隆位點(diǎn)的詳細(xì)圖譜如下：
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SacI Kozak DsRedM
|
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651
|
GAGCTCGCCA
|
|
CACCGAGGAC
|
GTCATCAAGG
|
AGTTCATGCA
|
|
|
|
|
CTCGAGCGGT
|
|
GTGGCTCCTG
|
CAGTAGTTCC
|
TCAAGTACGT
|
|
|
|
701
|
GTTCAAGGTG
|
CGCATGGAGG
|
GCTCCGTGAA
|
CGGCCACTAC
|
TTCGAGATCG
|
|
|
|
|
CAAGTTCCAC
|
GCGTACCTCC
|
CGAGGCACTT
|
GCCGGTGATG
|
AAGCTCTAGC
|
|
|
|
751
|
AGGGCGAGGG
|
CGAGGGCAAG
|
CCCTACGAGG
|
GCACCCAGAC
|
CGCCAAGCTG
|
|
|
|
|
TCCCGCTCCC
|
GCTCCCGTTC
|
GGGATGCTCC
|
CGTGGGTCTG
|
GCGGTTCGAC
|
|
|
|
801
|
CAGGTGACCA
|
AGGGCGGCCC
|
CCTGCCCTTC
|
GCCTGGGACA
|
TCCTGTCCCC
|
|
|
|
|
GTCCACTGGT
|
TCCCGCCGGG
|
GGACGGGAAG
|
CGGACCCTGT
|
AGGACAGGGG
|
|
|
|
851
|
CCAGTTCCAG
|
TACGGCTCCA
|
AGGCCTACGT
|
GAAGCACCCC
|
GCCGACATCC
|
|
|
|
|
GGTCAAGGTC
|
ATGCCGAGGT
|
TCCGGATGCA
|
CTTCGTGGGG
|
CGGCTGTAGG
|
|
|
|
901
|
CCGACTACAT
|
GAAGCTGTCC
|
TTCCCCGAGG
|
GCTTCACCTG
|
GGAGCGCTCC
|
|
|
|
|
GGCTGATGTA
|
CTTCGACAGG
|
AAGGGGCTCC
|
CGAAGTGGAC
|
CCTCGCGAGG
|
|
|
|
951
|
ATGAACTTCG
|
AGGACGGCGG
|
CGTGGTGGAG
|
GTGCAGCAGG
|
ACTCCTCCCT
|
|
|
|
|
TACTTGAAGC
|
TCCTGCCGCC
|
GCACCACCTC
|
CACGTCGTCC
|
TGAGGAGGGA
|
|
|
|
1001
|
GCAGGACGGC
|
ACCTTCATCT
|
ACAAGGTGAA
|
GTTCAAGGGC
|
GTGAACTTCC
|
|
|
|
|
CGTCCTGCCG
|
TGGAAGTAGA
|
TGTTCCACTT
|
CAAGTTCCCG
|
CACTTGAAGG
|
|
|
|
1051
|
CCGCCGACGG
|
CCCCGTAATG
|
CAGAAGAAGA
|
CTGCCGGCTG
|
GGAGCCCTCC
|
|
|
|
|
GGCGGCTGCC
|
GGGGCATTAC
|
GTCTTCTTCT
|
GACGGCCGAC
|
CCTCGGGAGG
|
|
|
|
1101
|
ACCGAGAAGC
|
TGTACCCCCA
|
GGACGGCGTG
|
CTGAAGGGCG
|
AGATCTCCCA
|
|
|
|
|
TGGCTCTTCG
|
ACATGGGGGT
|
CCTGCCGCAC
|
GACTTCCCGC
|
TCTAGAGGGT
|
|
|
|
1151
|
CGCCCTGAAG
|
CTGAAGGACG
|
GCGGCCACTA
|
CACCTGCGAC
|
TTCAAGACCG
|
|
|
|
|
GCGGGACTTC
|
GACTTCCTGC
|
CGCCGGTGAT
|
GTGGACGCTG
|
AAGTTCTGGC
|
|
|
|
1201
|
TGTACAAGGC
|
CAAGAAGCCC
|
GTGCAGCTGC
|
CCGGCAACCA
|
CTACGTGGAC
|
|
|
|
|
ACATGTTCCG
|
GTTCTTCGGG
|
CACGTCGACG
|
GGCCGTTGGT
|
GATGCACCTG
|
|
|
|
1251
|
TCCAAGCTGG
|
ACATCACCAA
|
CCACAACGAG
|
GACTACACCG
|
TGGTGGAGCA
|
|
|
|
|
AGGTTCGACC
|
TGTAGTGGTT
|
GGTGTTGCTC
|
CTGATGTGGC
|
ACCACCTCGT
|
|
|
|
BamHI HindIII
|
|
|
|
1301
|
GTACGAGCAC
|
GCCGAGGCCC
|
GCCACTCCGG
|
|
TCCAAGCTTC
|
|
|
|
|
CATGCTCGTG
|
CGGCTCCGGG
|
CGGTGAGGCC
|
|
AGGTTCGAAG
|
|
EcoRI EcoRV SalI XhoI XbaI SpeI ApaI
|
|
1351
|
TGCAGGAATT
|
CGATATCGTC
|
GACAGATCTC
|
TCGAGTCTAG
|
AACTAGTGGG
|
|
|
ACGTCCTTAA
|
GCTATAGCAG
|
CTGTCTAGAG
|
AGCTCAGATC
|
TTGATCACCC
|
??????pCMV-N-DsRed中沒有的酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-DsRed)包括：
|
AclI
|
AflII
|
AgeI
|
AscI
|
AsiSI
|
BaeI
|
|
BcgI
|
BlpI
|
BmgBI
|
Bpu10I
|
BsiWI
|
BsmBI
|
|
BspQI
|
BssHII
|
BstXI
|
BstZ17I
|
EarI
|
EcoNI
|
|
NruI
|
PmeI
|
PmlI
|
PpuMI
|
PshAI
|
PspXI
|
|
SapI
|
ScaI
|
SgrAI
|
SmaI
|
SrfI
|
SwaI
|
|
XcmI
|
XmaI
|
XmnI
|
|
??????pCMV-N-DsRed中的單酶切位點(diǎn)（Restriction enzymes that cut pCMV-N-DsRed once）包括：
|
NdeI
|
CA`TA,TG
|
240
|
|
PspOMI
|
G`GGCC,C
|
1398
|
|
SnaBI
|
TAC|GTA
|
346
|
|
ApaI
|
G,GGCC`C
|
1398
|
|
CspCI
|
,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN`
|
380
|
|
PvuI
|
CG,AT`CG
|
1478
|
|
NheI
|
G`CTAG,C
|
597
|
|
BclI
|
T`GATC,A
|
1634
|
|
BmtI
|
G,CTAG`C
|
597
|
|
MfeI
|
`AATT,G
|
1727
|
|
SacI
|
G,AGCT`C
|
651
|
|
HpaI
|
GTT|AAC
|
1740
|
|
Eco53kI
|
GAG|CTC
|
653
|
|
BtsI
|
GCAGTG,NN`
|
1814
|
|
BstEII
|
G`GTNAC,C
|
803
|
|
MluI
|
A`CGCG,T
|
1863
|
|
AhdI
|
GACNN,N`NNGTC
|
841
|
|
SfiI
|
GGCCN,NNN`NGGCC
|
2749
|
|
AfeI
|
AGC|GCT
|
945
|
|
ClaI
|
AT`CG,AT
|
2873
|
|
SbfI
|
CC,TGCA`GG
|
999
|
|
BspDI
|
AT`CG,AT
|
2873
|
|
BbsI
|
GAAGACNN`NNNN,
|
1083
|
|
EagI
|
C`GGCC,G
|
2939
|
|
BsrGI
|
T`GTAC,A
|
1201
|
|
KasI
|
G`GCGC,C
|
3032
|
|
PflMI
|
CCAN,NNN`NTGG
|
1241
|
|
PluTI
|
G,GCGC`C
|
3032
|
|
AleI
|
CACNN|NNGTG
|
1290
|
|
NarI
|
GG`CG,CC
|
3033
|
|
BamHI
|
G`GATC,C
|
1338
|
|
SfoI
|
GGC|GCC
|
3034
|
|
HindIII
|
A`AGCT,T
|
1344
|
|
MscI
|
TGG|CCA
|
3115
|
|
EcoRI
|
G`AATT,C
|
1356
|
|
PflFI
|
GACN`N,NGTC
|
3151
|
|
EcoRV
|
GAT|ATC
|
1364
|
|
Tth111I
|
GACN`N,NGTC
|
3151
|
|
SalI
|
G`TCGA,C
|
1368
|
|
BsrDI
|
GCAATG,NN`
|
3264
|
|
AccI
|
GT`MK,AC
|
1369
|
|
RsrII
|
CG`GWC,CG
|
3549
|
|
PaeR7I
|
C`TCGA,G
|
1380
|
|
BstBI
|
TT`CG,AA
|
3715
|
|
XhoI
|
C`TCGA,G
|
1380
|
|
BsaI
|
GGTCTCN`NNNN,
|
4022
|
|
XbaI
|
T`CTAG,A
|
1386
|
|
ApaLI
|
G`TGCA,C
|
4637
|
|
SpeI
|
A`CTAG,T
|
1392
|
|
PciI
|
A`CATG,T
|
4951
|
??????pCMV-N-DsRed質(zhì)粒中推薦使用的測序引物序列如下：
??????N-DsRed primer (1284-1303): 5′- TACACCGTGGTGGAGCAGTA -3′
??????T7 primer (1447-1468): 5′- GTAATACGACTCACTATAGGGC -3′
??????pCMV-N-DsRed的全序列信息：D2705 pCMV-N-DsRed-seq.txt
??????pCMV-N-DsRed質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后的表達(dá)效果請參考圖1。
圖1. pCMV-N-DsRed質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后的表達(dá)效果圖。左側(cè)為明場照片，右側(cè)為熒光照片。
包裝清單：
|
產(chǎn)品編號
|
產(chǎn)品名稱
|
包裝
|
|
D2705-1μg
|
pCMV-N-DsRed (紅色熒光蛋白)
|
1μg
|
|
D2705-100μg
|
pCMV-N-DsRed (紅色熒光蛋白)
|
100μg
|
|
—
|
說明書
|
1份
|
保存條件：
??????-20℃保存。
注意事項(xiàng)：
??????本質(zhì)粒未經(jīng)碧云天書面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實(shí)驗(yàn)室外的任何個人或單位。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。