??????本PCR試劑盒帶有Taq DNA Polymerase、PCR buffer、dNTP和上樣緩沖液,自備模板和引物即可進行PCR反應,適合用于普通的PCR或RT-PCR定性或定量檢測,也可以用于不太長的的DNA片段的克隆。 ??????Taq DNA Polymerase簡稱Taq酶或Taq,是最常用的DNA聚合酶之一。 ??????Taq DNA Polymerase是一種來源于嗜熱菌Thermus aquaticus的高度熱穩(wěn)定的DNA聚合酶,95℃孵育時的半衰期大于40分鐘。Taq酶的分子量為94kDa。Taq酶可以催化5'至3'方向的依賴于DNA模板的脫氧核苷酸的聚合。Taq酶沒有3'至5'的外切酶活性,有非常低的5'至3'外切酶活性。由于Taq酶沒有3'至5'的外切酶活性,因此在DNA聚合過程中相當于核苷酸轉移酶的作用,最終會導致PCR產(chǎn)物的3'末端會產(chǎn)生3'-dA overhangs,即產(chǎn)生帶一個A的3'粘端。本Taq DNA Polymerase為recombinant Taq DNA Polymerase,通過大腸桿菌表達純化獲得,和純化獲得的天然Taq DNA Polymerase在各方面的性質相同。 ??????活性定義:One unit of the enzyme catalyzes the incorporation of 10 nmol of deoxyribonucleotides into a polynucleotide fraction(adsorbed on DE-81) in 30 min at 70℃. Enzyme activity is assayed in the following mixture: 67 mM Tris-HCl(pH 8.8 at 25℃), 6.7 mM MgCl2, 1 mM 2-mercaptoethanol, 50 mM NaCl, 0.1 mg/ml BSA, 0.75 mM activated calf thymus DNA, 0.2 mM of each dNTP, 0.4 MBq/ml [3H]dTTP。 ??????純度:不含DNA內切酶、外切酶和磷酸酯酶,不含RNA酶,滿足常規(guī)PCR反應要求。 ??????酶儲存溶液:20 mM Tris-HCl(pH 8.0), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.5% (v/v) Nonidet P40, 0.5% (v/v) Tween 20 and 50% (v/v) glycerol。 ??????10X PCR Buffer(with Mg2+):100 mM Tris-HCl(pH 8.8 at 25℃), 500 mM KCl, 15mM MgCl2, 0.8% (v/v) Nonidet P40。 ??????失活或抑制:酚氯仿抽提可以使Taq酶失活,加入脫氧膽酸鈉至0.06%,SDS至0.01%,或sarkosyl至0.02%均可以抑制Taq酶。 ??????試劑盒帶有dNTP,該dNTP為dATP、dCTP、dGTP和dTTP的混合物,每種的濃度均為2.5mM。 ??????本試劑盒用于50微升的PCR反應體系,足夠用于160個反應,用于20微升的PCR反應體系,足夠用于400個反應。 包裝清單:
保存條件: ??????-20℃保存。 注意事項:? ??????由于PCR反應非常靈敏可以擴增目的基因序列超過1000萬倍,在使用Taq酶時請注意避免微量待擴增DNA的污染,并盡量考慮設置不加模板的空白對照以確認是否有待擴增DNA的污染。 ??????Taq?DNA?polymerase在PCR過程中每循環(huán)的出錯幾率約為2.2×10-5,對于大于1kb的DNA片段的克隆推薦使用出錯幾率更低的DNA聚合酶,例如Pfu DNA polymerase、BeyoTaq DNA polymerase等。對于普通的PCR或RT-PCR定性檢測或定量檢測,Taq DNA polymerase是選擇。 ??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。 ??????為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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