人腎小管組織提取物腎小管與腎小囊壁層相連的一條細(xì)長上皮性小管,具有重吸收和排泌作用.腎小管按不同的形態(tài)結(jié)構(gòu),分布位置和功能分成三部分;近端小管,細(xì)段和遠(yuǎn)端小管。腎小管在腎髓質(zhì)中。公司科技提供來自新鮮或冷凍人腎小管組織中高質(zhì)量的總RNA,PCR準(zhǔn)備的條cDNA鏈,蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標(biāo)本采集自各地方醫(yī)院,采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。 總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。 cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA鏈,以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,1 μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,保證產(chǎn)品的質(zhì)量。 蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人血管組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5% PMSF,-80度保存。 潛在的應(yīng)用: <1>已知基因的PCR克??;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標(biāo)測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué);<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。 細(xì)胞傳代: 人腎小管組織提取物1. 顯微鏡下觀察細(xì)胞,神經(jīng)干細(xì)胞懸浮成“神經(jīng)球”生長,通常情況下,每兩天換液一次,每四天傳代一次。 2. 在生物安全柜或者超凈臺中,將培養(yǎng)瓶中的含有神經(jīng)球的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到15ml離心管中。 3. 500rpm離心5分鐘,收集神經(jīng)干細(xì)胞。 4. 加入1ml 0.125%含有EDTA的胰酶,在超凈工作臺中輕輕吹打10次,注意不要消化太久,消化的目的是縮小神經(jīng)球的體積,不要消化能單個神經(jīng)干細(xì)胞,那樣會影響其生長速度。 5. 然后加入5ml培養(yǎng)基,吹打均勻后1000rpm 離心5分鐘。 6. 離心后,去掉上清,用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,按照1:2-1:3的比例進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。
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