"U27KM細(xì)胞：小鼠子宮頸癌細(xì)胞

細(xì)胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

U27KM Cell

細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書

1912-33-0

我常看到一個(gè)比較復(fù)雜的四步消化法，這個(gè)挺有意思，我也是次聽說，應(yīng)該是網(wǎng)友自己發(fā)展出來的方法，很有參考價(jià)值。但我估計(jì)這個(gè)方法可能對(duì)付少數(shù)非常怪異的細(xì)胞才需要這么復(fù)雜的程序。我目前養(yǎng)過的近300株細(xì)胞里面，還沒遇到這么怪異的。比如Caco2其實(shí)是很好消化的細(xì)胞，不需要胰酶孵育即可，只是有點(diǎn)成片分布。不要以為成片分布是自己沒養(yǎng)好，這個(gè)視細(xì)胞而定。如果和標(biāo)準(zhǔn)形態(tài)不一致，那可能是自己沒消化好導(dǎo)致的，但如果消化方法正確，仍然成片分布，甚至完全吹打成單細(xì)胞懸液，貼壁后仍然成片分布，這是細(xì)胞的特性，是因?yàn)橘N壁過程中重新聚集了。這個(gè)時(shí)候你拼了命要去讓它均勻分布，你的細(xì)胞之后會(huì)對(duì)你越來越不好；比較難消化的細(xì)胞(潤(rùn)洗方法5min還不能消化)，就以colon cancer為例，比如HCT15, LS411和KM12，這樣的細(xì)胞一般需要用少量胰酶孵育，但也不需要很多，一般100 mm dish，一次最多加入500ul，就足夠了，一般我加300ul。即使這樣難消化的細(xì)胞，一般不超過5min，即可見細(xì)胞成片移動(dòng)，就應(yīng)該停止消化。一些正常細(xì)胞也會(huì)有難消化的時(shí)候，比如tsDC細(xì)胞，但也只要用少量胰酶孵育，3min左右即可看到成片沙狀移動(dòng)。

U27KM細(xì)胞：小鼠子宮頸癌細(xì)胞

細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁或懸浮，詳見細(xì)胞說明書部分

MUS-M1細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁；細(xì)胞背景資料：小腸；平滑肌

hOMF細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁；細(xì)胞背景資料：口腔；成纖維細(xì)胞

M109細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁；細(xì)胞背景資料：肺癌；BALB/c

RAW264.7細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2傳代；細(xì)胞形態(tài)特性：不規(guī)則圓形；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)；細(xì)胞背景資料：此細(xì)胞株源自BALB/c小鼠由Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤?？僧a(chǎn)生溶菌酶；sIg-,Ia-，Thy-1.2-。為檢測(cè)到病毒顆粒的分泌，XC斑點(diǎn)形成試驗(yàn)陰性。該細(xì)胞可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖；可以經(jīng)抗體依賴分裂綿羊紅細(xì)胞與腫瘤靶細(xì)胞；LPS或PPD處理2天可誘導(dǎo)分裂紅細(xì)胞，但對(duì)腫瘤靶細(xì)胞無作用。

CEF細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁；細(xì)胞背景資料：胚胎；成纖維細(xì)胞

【細(xì)胞培養(yǎng)中細(xì)菌、霉菌的污染情況總結(jié)】細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀，根據(jù)感染細(xì)菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁變黃，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響明顯。仔細(xì)檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時(shí)放氣時(shí)間足夠，壓力足夠！尤其是和儲(chǔ)存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲(chǔ)存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象！可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理；霉菌：培養(yǎng)液是清亮的，倒置顯微鏡下無雜質(zhì)，37度孵箱培養(yǎng)2-3天，仍清亮，但出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，鏡下可見呈細(xì)絲狀的團(tuán)狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細(xì)胞仍可生長(zhǎng)，但時(shí)間長(zhǎng)之后，細(xì)胞的活力狀態(tài)變差，用酸銅溶液擦拭CO2孵箱內(nèi)，再把水盤里也加上飽和量的酸銅。或者在培養(yǎng)箱的托盤加入飽和的消毒二鈉高鹽液體,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有細(xì)胞暫時(shí)轉(zhuǎn)移，采用擦洗孵箱(包括隔板，箱壁)。并把放置在孵箱內(nèi)一個(gè)小時(shí)，使其蒸汽彌漫。待的氣味消散后，再移入細(xì)胞。孵箱應(yīng)定期清潔(2月左右)，尤其在多雨的季節(jié)。其它培養(yǎng)箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外燈照。預(yù)防霉菌污染，可在培養(yǎng)基里加3u/ml的兩性霉素或制霉菌素或D或雙抗；但細(xì)胞一旦污染，很難挽救，制霉菌素或D或雙抗都于事無補(bǔ)，建議舍棄該污染細(xì)胞，將環(huán)境徹底消毒，如果所有細(xì)胞都污染，可能是系統(tǒng)污染，檢查一下培養(yǎng)基和器材，如果只是個(gè)別污染，可能是操作問題，就要注意操作。

SPC-A-1細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：消化3-5分鐘。1：2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿；細(xì)胞形態(tài)特性：上皮細(xì)胞樣；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)；細(xì)胞背景資料：這株細(xì)胞源自一位男性肺腺癌患者。

Hela299細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁或懸浮，詳見細(xì)胞說明書部分；細(xì)胞背景資料：詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹

JB6-C30細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁或懸浮，詳見細(xì)胞說明書部分；細(xì)胞背景資料：詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹

SRS-82細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁或懸浮，詳見細(xì)胞說明書部分；細(xì)胞背景資料：詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹

A375[A-375]細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁或懸浮，詳見細(xì)胞說明書部分；細(xì)胞背景資料：詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹

Tregs細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：懸?。患?xì)胞背景資料：調(diào)節(jié)性T細(xì)胞

U27KM細(xì)胞：小鼠子宮頸癌細(xì)胞

細(xì)胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：1ml凍存管(兩支)

細(xì)胞來源說明：細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系

常見培養(yǎng)細(xì)胞預(yù)防污染的有效措施：體外培養(yǎng)的細(xì)胞受到嚴(yán)重污染時(shí)，有時(shí)即使想盡各種辦法也難以挽回。因此，防止污染，預(yù)防是關(guān)鍵。只有將預(yù)防措施貫穿于整個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)的始終，才能將發(fā)生污染的可能性降到最小程度。一般預(yù)防可從以下幾方面著手：1)添加抗生素：各種抗生素性質(zhì)不同，對(duì)各種微生物的作用也不同，聯(lián)合應(yīng)用比單用效果好，預(yù)防性應(yīng)用比污染后使用好(但迄今尚無對(duì)抗支原體特效抗生素)。但反復(fù)使用抗生素會(huì)使微生物產(chǎn)生耐藥性，且對(duì)細(xì)胞本身也有一定影響，因此為避免誘導(dǎo)抗藥細(xì)菌，應(yīng)定期更換培養(yǎng)系統(tǒng)中的抗生素，或盡可能不用抗生素處理；2)從物品、用品消毒滅菌著手：細(xì)胞培養(yǎng)所用物品清洗、消毒要徹底，各種溶液滅菌除菌要仔細(xì)，并在取樣檢菌一周后確認(rèn)無菌才能使用。同時(shí)，在無菌過濾操作中，隨著濾過體積的增大，濾膜破損的可能性增加，故應(yīng)選擇最后過濾的液體進(jìn)行檢測(cè)。定期對(duì)二氧化碳培養(yǎng)箱進(jìn)行消毒。具體操作：75%的酒精搽拭培養(yǎng)箱后，使用可移動(dòng)的紫外燈至少消毒30min，加入高壓滅菌過的超純水于培養(yǎng)箱水槽中保持濕度。也可配制300ml的飽和酸銅加3L滅菌超純水混合成酸銅溶液加入水槽中。

細(xì)胞背景資料：詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹

U27KM細(xì)胞：小鼠子宮頸癌細(xì)胞

細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。

傳代細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)：1)掌握好細(xì)胞消化的時(shí)間，消化時(shí)間過短時(shí)，細(xì)胞不宜從瓶壁脫落，過長(zhǎng)的消化會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞脫落、損傷；2)掌握好消化濃度，當(dāng)消化液濃度過高時(shí)，消化時(shí)間應(yīng)縮短，過低時(shí)細(xì)胞消化時(shí)間相對(duì)延長(zhǎng)。體內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)及其操作步驟：瘤細(xì)胞懸液接種1)無菌選取生長(zhǎng)良好(有光澤，淡紅色)瘤組織或?qū)?shù)生長(zhǎng)期培養(yǎng)瘤細(xì)胞；2)在PBS中將瘤組織剪碎后用勻漿器研磨，經(jīng)80～100目篩網(wǎng)過濾成細(xì)胞懸液；3)培養(yǎng)細(xì)胞應(yīng)用PBS洗兩遍；4)計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度至10(7)～10(8)/ml；5)常規(guī)消毒后，于接種部位(通常為背部或腋窩腹股溝皮下)用醫(yī)用注射器皮下潛行一段后注入細(xì)胞懸液(0.1ml/部位，＞10(6)細(xì)胞)。初次接種成功率低，細(xì)胞數(shù)盡可能多一些；6)次日注意觀察動(dòng)物一般情況。初次接種一般有一段較長(zhǎng)的潛伏期，以后隨著傳代潛伏期逐漸縮短，最后固定為一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的時(shí)間。腹水瘤的建立與腹水瘤的接種：將實(shí)體瘤細(xì)胞直接種于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤細(xì)胞，將這種腹水反復(fù)傳代，即可成為腹水瘤。初次傳代時(shí)，腹水常呈血性(含大量紅細(xì)胞)，反復(fù)傳代后腹水逐漸變成乳白色。腹水瘤的接種過程如下：1)將凍存或培養(yǎng)的腹水瘤細(xì)胞離心和洗滌，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)；2)消毒動(dòng)物，左下腹穿刺接種1×10(6)腹水瘤細(xì)胞；3)接種腹水瘤細(xì)胞后約7-12d，待小鼠腹部明顯膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用9號(hào)針頭抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽3-5ml；4)抽取的腹水經(jīng)3000rpm離心15min，收集上清，分裝凍存?zhèn)溆谩?/div>