??????碧云天的離心柱式RNAeasy?小RNA抽提試劑盒(RNAeasy? Small RNA Isolation Kit with Spin Column)，也稱離心柱式miRNA抽提試劑盒(miRNA Isolation Kit with Spin Column)，是一種基于離心柱法從動(dòng)物組織或培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞中安全、快速、便捷、穩(wěn)定、高效、高質(zhì)量地抽提miRNA等小于200個(gè)核苷酸(nucleotide, nt)的小RNA(small RNA)的試劑盒。
??????本試劑盒抽提得到的小RNA可用于反轉(zhuǎn)錄、RT-PCR、qPCR、Northern等常規(guī)實(shí)驗(yàn)，也可以用于基因芯片分析
(microarray)、高通量測(cè)序(high throughput sequencing)等對(duì)小RNA質(zhì)量要求較高的情況。
??????碧云天的三款離心柱式及Trizol法RNA抽提試劑盒的主要特點(diǎn)和差異如下：

??????動(dòng)物組織或細(xì)胞中的RNA按照長(zhǎng)度可以分為長(zhǎng)鏈RNA(long?RNA)和小RNA(small?RNA)，長(zhǎng)鏈RNA通常大于200nt(也常被稱為總RNA)，而小RNA通常小于200nt。長(zhǎng)鏈RNA按照是否編碼蛋白或多肽可以分為長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long noncoding RNA, lncRNA)和mRNA。小RNA主要包括非編碼的5.8S rRNA(ribosomal RNA)、5S rRNA、tRNA(transfer RNA)、microRNA(miRNA)、siRNA(small interfering RNA)、piRNA(Piwi-associated small RNA)、tsRNA(tRNA-derived small RNA)、srRNA(small rDNA-derived RNA)等。
??????本試劑盒抽提小RNA的基本流程如圖1所示。樣品在裂解液中迅速裂解，釋放出總RNA，然后在兩次高速離心過程中，通過離心柱將不同大小的RNA分離。次過柱時(shí)，200nt以上的RNA特異性結(jié)合到純化柱上，而200nt以下的小RNA穿柱而過被收集到液體收集管中；第二次過柱時(shí)，特定的結(jié)合體系使小RNA結(jié)合到另一個(gè)純化柱上。然后通過2次洗滌充分去除非特異性結(jié)合的蛋白、鹽等雜質(zhì)，最后用洗脫液將高純度的小RNA洗脫下來。

圖1. 離心柱式小RNA抽提流程示意圖

??????本試劑盒使用安全。本試劑盒通過特殊的柱純化介質(zhì)進(jìn)行小RNA分離純化，不僅能有效避免傳統(tǒng)的Trizol法抽提時(shí)使用的酚、氯仿等有毒有害有機(jī)試劑，也能有效避免如國(guó)外知名的Q品牌等公司使用類似于Trizol的裂解液裂解樣品、接著使用氯仿分層、后續(xù)再進(jìn)行柱純化等涉及的有毒有害有機(jī)試劑。
??????本試劑盒使用快速、便捷。本試劑盒采用柱純化，無需繁瑣的RNA沉淀步驟，抽提操作過程僅20-25分鐘。相比于傳統(tǒng)的Trizol抽提法，本試劑盒能夠有效去除大分子RNA，操作流程顯著簡(jiǎn)化，縮短了抽提時(shí)間，降低了RNA降解的風(fēng)險(xiǎn)。和國(guó)外同類柱純化產(chǎn)品相比，所需操作步驟和操作時(shí)間基本一致。
??????本試劑盒抽提獲得的小分子量RNA得率高、純度好。100萬培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞約能抽提得到1-2μg小RNA，5mg小鼠肝臟組織約能抽提得到1-1.5μg小RNA。A260/A280通常為2.0-2.2。本試劑盒與國(guó)際知名T品牌同類產(chǎn)品的抽提效果對(duì)比圖參見圖2。

??????圖2.本試劑盒與T品牌同類產(chǎn)品的小RNA抽提效果對(duì)比。樣品為凍存的100萬個(gè)HeLa細(xì)胞、5mg小鼠肝組織和5mg小鼠腎組織。洗脫液用量均為30μl。均取6μl洗脫的樣品經(jīng)變性處理后，在含7M尿素的15% TBE-PAGE中電泳約90分鐘后在NA-Red溶液中染色后拍照。碧云天試劑盒抽提產(chǎn)物的A260/A280依次為2.01、2.07和2.06；T品牌試劑盒抽提產(chǎn)物的A260/A280依次為1.93、1.79和1.29。實(shí)際抽提效果會(huì)因?qū)嶒?yàn)條件、檢測(cè)儀器等的不同而存在差異，本圖僅供參考。

??????本試劑盒用于抽提18-200?nt小RNA，主要包括5.8S rRNA、5S rRNA、tRNA、microRNA (miRNA)，以及short
interfering RNA (siRNA)、piRNA、tsRNA等，能夠有效去除基因組DNA和200nt以上的RNA，如28S rRNA、18S rRNA、mRNA等。
??????本試劑盒適用于新鮮或凍存的動(dòng)物組織或細(xì)胞樣品小RNA的抽提。樣品的用量對(duì)抽提效果影響較大，樣品用量過多會(huì)導(dǎo)致在次過柱時(shí)不能程度去除200nt以上的RNA，通常建議培養(yǎng)細(xì)胞的用量不超過100萬，動(dòng)物組織的用量不超過5mg。
??????本試劑盒可用于50個(gè)樣品的小RNA抽提。
包裝清單：

保存條件：
??????室溫保存，一年有效。
注意事項(xiàng)：
??????對(duì)于富含RNase的樣品(如動(dòng)物組織)，建議使用前在裂解液中添加二硫蘇糖醇(Dithiothreitol, DTT)至終濃度為40mM (例如1ml裂解液中加入20μl 2M DTT)或β-巰基乙醇至終濃度為1% (如1ml裂解液中加入10μl β-巰基乙醇)，含DTT或β-巰基乙醇的裂解液可在室溫放置1個(gè)月。
??????本試劑盒提供的所有試劑和耗材都是RNase-free，操作時(shí)應(yīng)小心，避免被污染。所有自行準(zhǔn)備的試劑和耗材也都應(yīng)是RNase-free。如果可能有RNase污染，可考慮用0.01%的DEPC水浸泡過夜，然后高溫高壓滅菌并烘干。操作時(shí)應(yīng)避免對(duì)著樣品或所使用的試劑盒耗材呼氣或說話，以防RNase污染。建議戴一次性口罩操作。
??????對(duì)于操作環(huán)境中RNA酶的去除，推薦使用碧云天生產(chǎn)的RNase and DNase Away (R0123)以去除實(shí)驗(yàn)桌面上或其它接觸面上的RNase。
??????使用凍存的細(xì)胞或組織抽提小RNA的效果通常比新鮮的細(xì)胞或組織差一些。因?yàn)樵诩?xì)胞或組織凍融過程中一些細(xì)胞或組織內(nèi)的RNase會(huì)被釋放出來并剪切樣品中的RNA。對(duì)于組織樣品，推薦使用碧云天生產(chǎn)的RNALater?動(dòng)物組織RNA穩(wěn)定保存液(R0118)進(jìn)行保存以保證樣品RNA的完整性。
??????本試劑盒所有操作均在室溫進(jìn)行，操作時(shí)無需冰浴。所有離心也均在室溫進(jìn)行。
??????廢液收集管在一次抽提中需多次使用，切勿中途丟棄。
??????結(jié)合液I、結(jié)合液II和洗滌液中含有乙醇，使用后須旋緊瓶蓋以防揮發(fā)，并須按照易燃試劑的相關(guān)規(guī)范進(jìn)行存放和使用。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。