化學(xué)名

4-[4-[[4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl]carbamoylamino]phenoxy]-N-methylpyridine-2-carboxamide

簡(jiǎn)稱

Sorafenib

別名

BAY 43-9006, BAY 545-9085, BAY-545-9085, Nexavar, sorafenib N-oxide, sorafenib tosylate, 索拉非尼

中文名

索拉菲尼

化學(xué)式

C₂₁H₁₆ClF₃N₄O₃

分子量

464.82

CAS號(hào)

284461-73-0

純度

99.5%

溶劑/溶解度

Water <1mg/ml; DMSO 63mg/ml warmed; Ethanol <1mg/ml

溶液配制

5mg加入1.08ml DMSO，或者每4.65mg加入1ml DMSO，配制成10mM溶液。SC0236-10mM用DMSO配制。

產(chǎn)品描述

Sorafenib是Raf-1、B-Raf和VEGFR-2的多重激酶抑制劑，無(wú)細(xì)胞試驗(yàn)中IC50分別為6nM、22nM和90nM。

信號(hào)通路

MAPK

靶點(diǎn)

Raf-1

mVEGFR2(Flk1)

mVEGFR3

B-Raf

B-Raf(V599E)

IC50

6nM

15nM

20nM

22nM

38nM

體外研究

Sorafenib抑制野生型和V599E突變型B-Raf活性，IC50分別為22nM和38nM。Sorafenib也能有效抑制mVEGFR2(Flk-1)、mVEGFR3、mPDGFRβ、Flt3和c-Kit，IC50分別為15nM、20nM、57nM、58nM和68nM。Sorafenib能夠較弱地抑制FGFR-1，IC50為580nM。Sorafenib對(duì)ERK-1、MEK-1、EGFR、HER-2、IGFR-1、c-Met、PKB、PKA、cdk1/cyclinB、PKCα、PKCγ和pim-1沒(méi)有活性。Sorafenib顯著抑制NIH 3T3細(xì)胞中VEGFR2磷酸化，IC50為30nM，也會(huì)抑制HEK-293細(xì)胞中Flt-3磷酸化，IC50為20nM。Sorafenib有效阻斷大多數(shù)細(xì)胞中MEK 1/2和ERK 1/2磷酸化，但不阻斷A549或H460細(xì)胞中該過(guò)程，同時(shí)不影響PKB通路的抑制。Sorafenib抑制HAoSMC和MDA-MB-231細(xì)胞的增殖，IC50分別為0.28μM和2.6μM。除了抑制RAF/MEK/ERK信號(hào)通路，Sorafenib tosylate顯著抑制eIF4E的磷酸化作用，并以MEK/ERK依賴的方式下調(diào)肝癌(HCC)細(xì)胞中Mcl-1水平。Sorafenib抑制PLC/PRF/5和HepG2細(xì)胞的增殖，IC50分別為6.3μM和4.5μM，并誘導(dǎo)顯著的細(xì)胞凋亡。

體內(nèi)研究

Sorafenib(~60mg/kg)口服給藥，對(duì)各種人腫瘤異種移植模型，包括MDA-MB-231、Colo-205、HT-29、DLD-1、NCI-H460和A549表現(xiàn)出廣譜的、劑量依賴性抗腫瘤活性，而沒(méi)有毒性。與抗腫瘤功效相聯(lián)系，Sorafenib治療有效抑制HT-29和MDA-MB-231異種移植物中MEK 1/2磷酸化和pERK 1/2水平，但對(duì)Colo-205異種移植物沒(méi)有作用，并且也能顯著抑制MDA MB-231、HT-29和Colo-205腫瘤異種移植物中腫瘤微血管面積(MVA)和微血管密度(MVD)。在SCID小鼠體內(nèi)，Sorafenib治療對(duì)PLC/PRF/5腫瘤異種移植產(chǎn)生劑量依賴性生長(zhǎng)抑制，10mg/kg和30mg/kg劑量下，TGIs分別為49%和78%，與ERK和eIF4E磷酸化抑制，微血管面積減少，和腫瘤細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)相一致。Sorafenib通過(guò)下調(diào)NF-κB介導(dǎo)的Mcl-1和cIAP2表達(dá)的作用機(jī)制使bax-/-細(xì)胞對(duì)TRAIL劑量依賴性敏感。Sorafenib(30-60mg/kg)與TRAIL(5mg/kg)結(jié)合對(duì)TRAIL抗性HCT116 bax-/-和HT29腫瘤異種移植物表現(xiàn)出顯著的功效。

臨床實(shí)驗(yàn)

N/A

特征

N/A

酶活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

方法

重組桿狀病毒表達(dá)的Raf-1(殘基305-648)和B-Raf(殘基409-765)以融合蛋白純化。全長(zhǎng)人MEK-1由PCR產(chǎn)生，并以大腸桿菌裂解物中的融合蛋白純化。將Sorafenib加入到含Raf-1(80ng)或B-Raf(80ng)以及MEK-1(1μg)混合物的實(shí)驗(yàn)緩沖液[20mM Tris(pH8.2)、100mM NaCl、5mM MgCl2和0.15% β-巰基乙醇]中，DMSO終濃度為1%。加入25μl 10μM γ[33P]ATP(400Ci/mol)啟動(dòng)Raf激酶試驗(yàn)(終體積50μl)，并在32℃下培育25分鐘。磷酸化的MEK-1通過(guò)過(guò)濾到磷酸纖維素板上采集，使用1%磷酸洗掉未結(jié)合的放射性。微波爐加熱干燥后，使用β型板計(jì)數(shù)器量化過(guò)濾器結(jié)合放射性。人VEGFR2(KDR)激酶域被表達(dá)，并從Sf9裂解物中純化。VEGFR2的時(shí)間分辨熒光分析法能量轉(zhuǎn)移測(cè)試在96孔不透明板中以時(shí)間分辨熒光分析法能量轉(zhuǎn)移格式進(jìn)行。最終反應(yīng)條件如下：1到10μM ATP、25nM poly GT生物素、2nM銪標(biāo)記的磷酸(p)-酪氨酸抗體(PY20)、10nM APC、1% DMSO終濃度的1到7nM細(xì)胞質(zhì)激酶域、50mM HEPES(pH7.5)、10mM MgCl2、0.1mM EDTA、0.015% Brij-35、0.1mg/ml BSA和0.1% β-巰基乙醇。反應(yīng)體積為100μl，加入酶啟動(dòng)反應(yīng)。反應(yīng)啟動(dòng)1.5到2.0小時(shí)后，板以615和665nm在Perkin-Elmer VictorV多標(biāo)記分析儀上讀數(shù)。信號(hào)按如下比率計(jì)算：對(duì)每孔(665nm/615nm)×10,000。對(duì)IC50的產(chǎn)生，在酶起始反應(yīng)之前加入Sorafenib。50倍的庫(kù)存板由Sorafenib在50% DMSO/50%蒸餾水溶液中連續(xù)稀釋制得。最終Sorafenib在1% DMSO中的濃度范圍為10μM到4.56nM。

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞系

MDA-MB-231和HAoSMC

濃度

溶解于DMSO，終濃度為~10μM

處理時(shí)間

72小時(shí)

方法

細(xì)胞在逐漸增加濃度的Sorafenib下暴露72小時(shí)。細(xì)胞數(shù)通過(guò)Cell TiterGlo ATP發(fā)光測(cè)定試劑盒進(jìn)行定量。該試驗(yàn)通過(guò)測(cè)定基于細(xì)胞中ATP量的發(fā)光信號(hào)，測(cè)量每孔中的活細(xì)胞。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

動(dòng)物模型

雌性NCr-nu/nu小鼠，皮下植入MDA-MB-231、Colo-205、HT-29、H460或A549細(xì)胞

配制

以4倍(4×儲(chǔ)備溶液，稀釋為1×)溶解于聚氧乙烯蓖麻油/乙醇(50:50)

劑量

~60mg/kg

給藥方式

口服，每天一次

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱

包裝

SC0236-10mM

Sorafenib (Raf抑制劑)

10mM×0.2ml

SC0236-5mg

Sorafenib (Raf抑制劑)

5mg

SC0236-25mg

Sorafenib (Raf抑制劑)

25mg

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說(shuō)明書(shū)

1份