化學(xué)名

Rapamycin, 42-[3-hydroxy-2-(hydroxymethyl)-2-methylpropanoate]

簡稱

Temsirolimus

別名

CCI 779, CCI-779, Torisel

中文名

N/A

化學(xué)式

C₅₆H₈₇NO₁₆

分子量

1030.29

CAS號

162635-04-3

純度

98%

溶劑/溶解度

Water<1mg/ml; DMSO75mg/ml; Ethanol75mg/ml

溶液配制

5mg加入0.49ml DMSO，或者每10.3mg加入1ml DMSO，配制成10mM溶液。SF2672-10mM用DMSO配制。

產(chǎn)品描述

Temsirolimus (CCI-779, NSC 683864)是一種特定的mTOR抑制劑，在無細(xì)胞試驗(yàn)中IC50為1.76μM。

信號通路

PI3K/Akt/mTOR

靶點(diǎn)

mTOR

－

－

－

－

IC50

1.76μM

－

－

－

－

體外研究

Temsirolimus抑制核糖體蛋白S6磷酸化，作用于PTEN陽性DU145細(xì)胞比作用于PTEN陰性PC-3細(xì)胞更有效，且抑制細(xì)胞生長和細(xì)胞的克隆生存，這種作用存在濃度依賴性。Temsirolimus按100ng/ml劑量處理原代人淋巴細(xì)胞性白血病(ALL)細(xì)胞，顯著抑制增殖，且誘導(dǎo)凋亡。在FKBP12存在時(shí)，Temsirolimus有效抑制mTOR激酶活性，IC50為1.76μM，與Rapamycin(IC50為1.74μM)類似。Temsirolimus按納摩爾濃度(10nM到<5μM)處理，通過FKBP12依賴機(jī)制，具有適度的選擇性抗增殖活性，在低微摩爾濃度(5-15μM)時(shí)，可以完全抑制多種腫瘤細(xì)胞增殖，涉及FKBP12非依賴性的mTOR信號阻斷。Temsirolimus按微摩爾而不是納摩爾濃度(20μM)處理，顯著降低全部蛋白質(zhì)合成，也顯著降低多聚核糖體的分解，伴隨著翻譯延伸因子eEF2和翻譯起始因子eIF2A的磷酸化快速提高。

體內(nèi)研究

Temsirolimus按20mg/kg劑量腹腔注射，每周5天，顯著延遲DAOY移植瘤生長，與對照組相比，處理一周，延遲160%，處理兩周，延遲240%。Temsirolimus按100mg/kg高劑量單獨(dú)給藥腹腔注射，一周內(nèi)，誘導(dǎo)腫瘤體積衰退37%。Temsirolimus處理2兩周，也延遲抗Rapamycin的U251移植瘤生長，延遲148%。Temsirolimus作用于患Huntington疾病的小鼠模型，抑制mTOR，提高四種不同行為任務(wù)的表現(xiàn)，且降低聚合形成。Temsirolimus處理8226、OPM-2和U266移植瘤的皮下生長，誘導(dǎo)顯著的抗癌反應(yīng)，這種作用存在劑量依賴性，作用于8226和OPM-2移植瘤，ED50分別為20mg/kg和2mg/kg，與抑制增殖和血管生長，誘導(dǎo)凋亡和腫瘤細(xì)胞尺寸降低相關(guān)。每天按10mg/kg劑量處理攜帶人ALL的NOD/SCID移植瘤模型，降低外周血膨脹和脾腫大。

臨床實(shí)驗(yàn)

N/A

特征

N/A

酶活性檢測實(shí)驗(yàn)

方法

Flag標(biāo)記的野生型人mTOR(Flag-mTOR) DNA結(jié)構(gòu)短暫轉(zhuǎn)染進(jìn)HEK293細(xì)胞。48小時(shí)后，進(jìn)行蛋白提取和Flag-mTOR純化。在體外，在不同濃度Temsirolimus存在而沒 FKBP12時(shí)，在96孔板上進(jìn)行純化的Flag-mTOR激酶實(shí)驗(yàn)，通過解離增強(qiáng)鑭系熒光免疫分析(DELFIA)，使用His6-S6K1作為底物來測量。在激酶實(shí)驗(yàn) buffer(10mM Hepes pH 7.4，50mM NaCl，50mM β-甘油磷酸，10mM MnCl₂，0.5mM DTT，0.25μM微囊藻素LR和100μg/ml BSA)上次對酶進(jìn)行稀釋。每孔中，12μl稀釋的酶與0.5μl Temsirolimus混合。加入含ATP和His6-S6K的12.5μl激酶buffer開始激酶反應(yīng)，終體積為25μl，含800ng/ml FLAG-mTOR，100μM ATP和1.25μM His6-S6K。反應(yīng)板在室溫下溫和震蕩溫育2小時(shí)，加入25μl終止液(20mM Hepes pH 7.4，20mM EDTA和20mM EGTA)終止反應(yīng)。磷酸化的(Thr-389)His6-S6K的DELFIA檢測在室溫下使用單克隆抗P(T389)-p70S6K抗體進(jìn)行，抗體使用銪-N1-ITC(Eu)(每種抗體10.4Eu)標(biāo)記。45μl終止的激酶反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到含55μl PBS的MaxiSorp板上。His6-S6K 粘附2小時(shí)后，吸除每孔，使用PBS沖洗。加入含40ng/ml Eu-P(T389)-S6K抗體的100μl DELFIA buffer。輕輕攪拌，再使抗體結(jié)合持續(xù)進(jìn)行1小時(shí)。吸除每孔，然后使用含0.05% Tween-20(PBST)的PBS沖洗4次。每孔加入100μl DELFIA增強(qiáng)溶液，然后在PerkinElmer Victor模板酶標(biāo)儀上讀數(shù)。

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞系

A549, H157, H460, H446, HCT116, HT29, SW480, DLD1, Caco2, LNCap, DU145, MDA468, MDA231, HEK293, PC3-MM2

濃度

溶于DMSO，終濃度為~20μM

處理時(shí)間

72小時(shí)

方法

使用不同濃度Temsirolimus處理細(xì)胞72小時(shí)。處理后，通過MTS染料轉(zhuǎn)換，使用CellTiter AQ檢測試劑盒測定存活細(xì)胞密度。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

動(dòng)物模型

皮下注射DAOY或U251細(xì)胞的雌性無胸腺裸鼠

配制

在100% EtOH作為50mg/ml儲(chǔ)存液中制備，然后在5% Tween-80和5% PEG 400中稀釋

劑量

20mg/kg

給藥方式

每天注射，每周5次

產(chǎn)品編號

產(chǎn)品名稱

包裝

SF2672-10mM

Temsirolimus (mTOR抑制劑)

10mM×0.2ml

SF2672-5mg

Temsirolimus (mTOR抑制劑)

5mg

SF2672-25mg

Temsirolimus (mTOR抑制劑)

25mg

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說明書

1份