??????碧云天生產(chǎn)的顯色法TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit)為您提供了一種高靈敏度又快速簡(jiǎn)便的細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法。對(duì)于待檢測(cè)的細(xì)胞或組織樣品，經(jīng)過(guò)生物素標(biāo)記和后續(xù)的DAB顯色等步驟，即可在普通光學(xué)顯微鏡下觀察到凋亡細(xì)胞。
??????細(xì)胞在發(fā)生凋亡時(shí)，會(huì)激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會(huì)切斷核小體間的基因組DNA。細(xì)胞凋亡時(shí)抽提DNA進(jìn)行電泳檢測(cè)，可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA?ladder?；蚪MDNA斷裂時(shí)，暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal?Deoxynucleotidyl?Transferase,TdT)的催化下加上生物素(Biotin)標(biāo)記的dUTP(Biotin-dUTP)，隨后和辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的Streptavidin (Streptavidin-HRP)結(jié)合，最后在HRP的催化下通過(guò)DAB顯色來(lái)顯示凋亡細(xì)胞，從而可以通過(guò)普通光學(xué)顯微鏡檢測(cè)到凋亡的細(xì)胞，這就是TUNEL(TdT-mediated dUTP?Nick-End?Labeling)法檢測(cè)細(xì)胞凋亡的原理。
??????本試劑盒有如下優(yōu)點(diǎn)。(1)高靈敏度：背景染色極低，陽(yáng)性染色強(qiáng)，可以在單細(xì)胞水平檢測(cè)到細(xì)胞凋亡，同時(shí)由于凋亡早期就有 DNA斷裂，可以檢測(cè)到早期的細(xì)胞凋亡。(2)特異性好：TUNEL檢測(cè)時(shí)通常更容易標(biāo)記凋亡細(xì)胞，而不容易標(biāo)記壞死細(xì)胞。(3)快速：僅需約2-3個(gè)小時(shí)即可完成。(4)應(yīng)用范圍廣：可以用于檢測(cè)冷凍或石蠟切片中的細(xì)胞凋亡情況，也可以檢測(cè)培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞的凋亡情況。(5) 實(shí)測(cè)效果好：參考圖1。

??????圖1. 本試劑盒的檢測(cè)效果圖。A. HeLa細(xì)胞未處理或用DNase I室溫孵育10分鐘后的檢測(cè)效果圖。B. Hela細(xì)胞未處理或用10μM喜樹(shù)堿(Camptothecin)處理24小時(shí)后的檢測(cè)效果圖。圖中棕褐色為DAB染色陽(yáng)性細(xì)胞。本圖中的染色實(shí)驗(yàn)均在12孔板中進(jìn)行。本圖僅作參考，不同的樣品不同的檢測(cè)條件，實(shí)際獲得的結(jié)果可能和上圖有較明顯的差別。

??????TUNEL法特異性檢測(cè)細(xì)胞凋亡時(shí)產(chǎn)生的DNA斷裂，但不會(huì)檢測(cè)出射線(xiàn)等誘導(dǎo)的DNA斷裂(和細(xì)胞凋亡時(shí)的斷裂方式不同)。這樣一方面可以把凋亡和壞死區(qū)分開(kāi)，另一方面也不會(huì)把射線(xiàn)等誘導(dǎo)發(fā)生DNA斷裂的非凋亡細(xì)胞判斷為凋亡細(xì)胞。
??????極少數(shù)細(xì)胞凋亡時(shí)沒(méi)有DNA斷裂，此時(shí)不適用TUNEL法檢測(cè)。在個(gè)別類(lèi)型的壞死細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)TUNEL檢測(cè)呈陽(yáng)性。在需要嚴(yán)格判斷細(xì)胞凋亡的情況下，同時(shí)檢測(cè)多個(gè)凋亡指標(biāo)。
??????本試劑盒足夠檢測(cè)50個(gè)樣品。?

保存條件：
??????-20℃保存，DAB顯色液A和DAB顯色液B需避光保存。
注意事項(xiàng)：
??????需自備用于洗滌細(xì)胞的PBS或HBSS，用于封片的抗熒光淬滅封片液(P0126)等適當(dāng)?shù)姆馄?，用于固定?%多聚甲醛或向碧云天訂購(gòu)免疫染色固定液(P0098)，同時(shí)需自備含0.3%?Triton?X-100的PBS或向碧云天訂購(gòu)免疫染色強(qiáng)力通透液(P0097)。需自備過(guò)氧化氫。
??????如果用于石蠟切片的檢測(cè)，需自備蛋白酶K和二甲苯。蛋白酶K(ST533)可以向碧云天訂購(gòu)。
??????DAB對(duì)人體有害，操作時(shí)請(qǐng)小心，并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
??????本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。