T4 RNA 連接酶1催化3’→5’磷酸二酯鍵的形成，使核苷酸的5’-磷酸末端和3’-羥基末端連接，伴隨著ATP水解為AMP和PPi。T4 RNA 連接酶1的作用底物包括單鏈RNA、DNA及二核苷焦磷酸，它可催化ssDNA和RNA的連接，相對于ssDNA，該酶對RNA分子的連接和環(huán)化效率更高。 [T4 RNA連接酶I]

組分

組分名稱 數(shù)量
T4 RNA Ligase1 (10 U/μl) 100μl
10×T4 RNA Ligase Buffer 250μl
10mM ATP 100μl
50% PEG 8000 500μl

應(yīng)用

連接單鏈RNA和DNA
RNA 3’末端標(biāo)記
RNA和DNA分子內(nèi)和分子間連接
合成單鏈寡脫氧核苷酸
蛋白質(zhì)中摻入非天然氨基酸

活性定義

1單位指在1×T4 RNA Ligase Buffer 中，37℃條件下，30分鐘內(nèi)將1nmol的5’-[32P]rA16轉(zhuǎn)化為磷酸鹽不溶物質(zhì)所需要的酶量。

儲存

-20℃可保存3年。

使用注意事項

1.1× T4 RNA Ligase Buffer：50mM Tris-HCl pH 7.5，10mM MgCl2，1mM DTT。該酶反應(yīng)時需要加入終濃度1mM ATP。
2. 反應(yīng)溫度37℃，65℃ 10min可使該酶失活。
3. 該酶的連接底物無論是ssDNA還是ssRNA均需要5’-磷酸化或預(yù)腺苷化。
4. 該酶不能連接雙鏈DNA或RNA。
5. 加入終濃度5~10% PEG 8000或增加孵育時間可提高連接效率。