產(chǎn)品規(guī)格 （CAT#: LM1040）
EHA101： 100μl/支
pK7WGF2（control vector，10ng/μl ) 10μl
保存條件(保質(zhì)期)： -80℃（12個月）
EHA101感受態(tài)細(xì)胞基因型
C58 (rifR) Ti pEHA101 (pTiBo542 D T-DNA) (kanR) Nopaline
EHA101感受態(tài)細(xì)胞產(chǎn)品說明
EHA101菌株為C58型背景，核基因中含有篩選標(biāo)簽——利福平抗性基因rif，為了便于轉(zhuǎn)化操作，此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運功能的胭脂堿型Ti質(zhì)粒pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)，此質(zhì)粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能被破壞，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移)。pEHA101 (pTiBo542DT-DNA) 型Ti質(zhì)粒含有篩選標(biāo)簽：kan，賦予EHA101菌株和卡那霉素抗性，適用于玉米、水稻、煙草等植物的轉(zhuǎn)基因操作。本公司生產(chǎn)的EHA101化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pK7WGF2質(zhì)粒（壯觀霉素抗性）檢測轉(zhuǎn)化效率>104cfu/μg DNA。
EHA101感受態(tài)細(xì)胞操作方法
1. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化，處于冰水混合狀態(tài)時插入冰中。
2.每100 μl感受態(tài)加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA（轉(zhuǎn)化效率較高，次使用前做預(yù)實驗確定所加質(zhì)粒的量），用手撥打管底混勻，依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。
3. 加入700 μl無抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基，于28℃，200 rpm振蕩培養(yǎng)2~3小時。
4. 6000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天。
（當(dāng)平板只含有轉(zhuǎn)化所用雙元載體抗生素時，28℃培養(yǎng)48小時即可；平板中同時加入雙元載體抗生素，20 μg/ml rif 時，需28℃培養(yǎng)60小時；如果使用的平板含有50 μg/ml rif 則需要28℃培養(yǎng)72-90小時）。
關(guān)鍵字： EHA101_感受態(tài)細(xì)胞_基因_
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