??????碧云天生產(chǎn)的內(nèi)源性堿性磷酸酶封閉液(Endogenous Alkaline Phosphatase Blocking Buffer)主要應(yīng)用于免疫組化染色(Immunohistochemistry, IHC)、免疫細(xì)胞化學(xué)染色(Immunocytochemistry, ICC)以及原位雜交(In situ hybridization, ISH)時(shí)組織及細(xì)胞內(nèi)源性堿性磷酸酶的封閉。
??????本產(chǎn)品適用于培養(yǎng)的細(xì)胞、冰凍切片和石蠟切片。
??????堿性磷酸酶(Alkaline Phosphatase, AP/ALP/AKP/ALKP/ALPase/Alk Phos)常被稱作堿性磷酸酯酶(EC 3.1.3.1)，是一類水解酶，通過水解磷酸單酯將底物分子上的磷酸基團(tuán)除去，并生成磷酸根離子和自由的羥基，其去磷酸化作用的底物包括核苷酸、蛋白質(zhì)和生物堿等，并在堿性條件下最為有效。該酶是一組同功酶的統(tǒng)稱。常見的小牛腸堿性磷酸酶(Calf?Intestinal?Alkalin
Phosphatase,?CIAP/CIP)被廣泛用于二抗等的標(biāo)記最終用于蛋白和核酸等的檢測，也常用于DNA或RNA?5'和3'末端的去磷酸化(去單磷酸化)，特別是質(zhì)粒的5'末端去磷酸化以避免質(zhì)粒自連等。
??????內(nèi)源性堿性磷酸酶廣泛存在于一些細(xì)胞和組織中，包括膀胱上皮、卵巢、腎臟和唾液腺等。腸堿性磷酸酶普遍存在于小腸上皮細(xì)胞中，人胎盤堿性磷酸酶通常由胎盤細(xì)胞的微絨毛產(chǎn)生。細(xì)胞涂片制備過程中，堿性磷酸酶存在于中性分葉核粒細(xì)胞、中性桿狀核粒細(xì)胞、中性晚幼粒細(xì)胞中。慢性和急性粒細(xì)胞性的白血病細(xì)胞以及一些嗜中性類白血病反應(yīng)的白血病細(xì)胞中也可能存在堿性磷酸酶。
??????利用堿性磷酸酶進(jìn)行免疫組化(IHC)或免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC)等檢測時(shí)，內(nèi)源性堿性磷酸酶的存在會(huì)使特異性的染色被內(nèi)源性堿性磷酸酶的背景染色所干擾。通過適當(dāng)?shù)姆忾]液來封閉內(nèi)源性堿性磷酸酶，可以有效降低背景染色，提高信噪比。
??????本封閉液的主要有效成分是Levamisole等，能夠抑制除小牛腸堿性磷酸酶(Calf Intestinal Alkaline Phosphatase, CIAP/CIP)外的絕大多數(shù)其它類型的堿性磷酸酶。通常使用的堿性磷酸酶標(biāo)記二抗、堿性磷酸酶標(biāo)記Streptavidin等中包含的都是小牛腸堿性磷酸酶(CIAP)。
??????本產(chǎn)品和國內(nèi)外同類產(chǎn)品相比，具有不會(huì)干擾特異性信號(hào)的優(yōu)點(diǎn)。本產(chǎn)品經(jīng)過反復(fù)測試和優(yōu)化，不會(huì)對小牛腸堿性磷酸酶產(chǎn)生抑制作用，即不會(huì)抑制常規(guī)的堿性磷酸酶檢測體系的特異性信號(hào)(參考圖1)。因此在IHC或ICC等檢測時(shí)，可以直接在堿性磷酸酶顯色液中添加本產(chǎn)品以有效抑制內(nèi)源性的堿性磷酸酶，無須擔(dān)心對于特異性信號(hào)的抑制作用。

??????圖1.?內(nèi)源性堿性磷酸酶封閉液不會(huì)干擾常規(guī)的堿性磷酸酶標(biāo)記二抗的檢測體系。把堿性磷酸酶標(biāo)記的二抗按照1:50、1:100、1:200、1:500、1:1000、和1:2000稀釋后滴1微升至硝酸纖維素膜上(依次為上排第1-4個(gè)點(diǎn)和下排第1和第2個(gè)點(diǎn))，干燥后，直接用堿性磷酸酶顯色液(Control)或添加了本產(chǎn)品的堿性磷酸酶顯色液(Blocking)進(jìn)行顯色反應(yīng)。上圖中可見使用本產(chǎn)品的封閉液組(Blocking)和對照組(Control)相比，對于各個(gè)不同濃度的堿性磷酸酶顯色信號(hào)都沒有出現(xiàn)下降。

??????碧云天生產(chǎn)的內(nèi)源性堿性磷酸酶封閉液(20X)，使用便捷，按照每毫升堿性磷酸酶染色液加入50微升本產(chǎn)品(即20倍稀釋)，混勻后按照常規(guī)的堿性磷酸酶染色液使用即可。
??????一個(gè)包裝的本產(chǎn)品如果按照每樣需要使用100微升的染色液來計(jì)算，共可以用于約1200個(gè)樣品。

包裝清單：

保存條件：
??????-20℃保存，至少一年有效。4℃保存，至少一個(gè)月有效。
注意事項(xiàng)：
??????內(nèi)源性堿性磷酸酶的抑制是可逆的，本封閉液必須與堿性磷酸酶底物溶液同時(shí)使用。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。