Ni純化樹(shù)脂產(chǎn)品說(shuō)明：
六聚組氨酸(6xHis)具有分子量小，鑒別方便，便于純化等優(yōu)點(diǎn)，在進(jìn)行重組蛋白表達(dá)過(guò)程中，普遍作為檢測(cè)和純化的常用蛋白標(biāo)簽使用。金屬（Ni）鎳離子被螯合到固相支持物共價(jià)結(jié)合的反應(yīng)性基團(tuán)上，形成Ni-NTA(次氨基三乙酸)、Ni-IDA(亞氨基二乙酸)，樹(shù)脂能夠特異性的與六聚組氨酸(6XHis)結(jié)合。當(dāng)變性的或者非變性的帶有His標(biāo)簽的融合蛋白溶液流經(jīng)Ni親和純化柱時(shí)，帶有His標(biāo)簽的融合蛋白結(jié)合在Ni-NTA純化介質(zhì)上，經(jīng)過(guò)洗滌后，不帶His標(biāo)簽的蛋白被洗滌下去，結(jié)合在Ni純化樹(shù)脂的融合蛋白經(jīng)過(guò)一定濃度的咪唑或低PH緩沖液，洗脫條件非常溫和，方便快捷的得到高純度蛋白的同時(shí)，可以保持其天然結(jié)構(gòu)和活性，獲得的蛋白可以直接用于功能性檢測(cè)。

主要特色

操作簡(jiǎn)便—蛋白可在變性/非變性條件下進(jìn)行純化，實(shí)驗(yàn)室常用儀器和試劑即可滿足實(shí)驗(yàn)要求。 
兼容性好：可兼容各類變性劑，還原劑等（可兼容10mM DTT）
純度高：一步純化即可以得到90%純度的蛋白
結(jié)合能力強(qiáng)：最高蛋白結(jié)合量為20mg/ml

使用方法 
1、離心收集500 ml表達(dá)目標(biāo)蛋白的大腸桿菌，凍融或超聲破菌于20 ml破菌緩沖液。破菌緩沖液: 20-50 mM Tris-HCl，pH 7.3-8.3，含0.25 M-0.5M NaCl，其它常用緩沖液為PBS。這一步可以適當(dāng)加入PMSF作為蛋白酶抑制劑，但是不能使用EDTA。還原劑使用2 mM 2-ME，避免使用DTT，因?yàn)镈TT會(huì)造成Ni/Co離子還原。 
2、離心取上清，上樣于預(yù)先平衡好的純化柱（10倍柱體積上樣緩沖液平衡），通常自然流速可以很好結(jié)合。少數(shù)情況下，流速過(guò)慢，可以使用硅膠管控制上樣速度。 
3、樣品上完以后，使用破菌緩沖液洗柱10個(gè)柱體積，注意將純化柱側(cè)壁上的殘留樣品洗干凈。 
4、使用10-20倍柱體積洗雜緩沖液將雜蛋白從純化柱上洗去，如果雜蛋白太多可以加大洗雜體積。洗雜緩沖液：破菌緩沖液中補(bǔ)加咪唑到終濃度20 mM。咪唑可以使用上樣緩沖液配制成500 mM母液，用前加入。 
5、洗雜結(jié)束以后，使用4-10倍柱體積洗脫緩沖液將目標(biāo)蛋白洗脫。通常目標(biāo)蛋白會(huì)在第二個(gè)柱體積中開(kāi)始流出。洗脫緩沖液：上樣緩沖液中補(bǔ)加咪唑到終濃度200 mM。 
6、收集完成以后，使用10倍柱體積1% 醋酸沖洗純化柱，再使用PBS/TBS平衡pH，大量蒸餾水水洗柱，最后加入5 ml 20%乙醇，保存在4 ℃，不要在-20 ℃凍結(jié)。