Renilla luciferase之底物腔腸素Coelenterazine
CAS 編號(hào):55779-48-1
貨號(hào):luc006
分子式:C26H21N3O3
分子量: 423.48g/mol
純度:98%
保存:-20°C避光,保存在惰性氣體下
Coelenterazine,在水生生物中(例如海腎、海蜇、水螅等)發(fā)現(xiàn)的天然腔腸素可作為很多熒光素酶(包括海腎熒光素酶Rluc)的作用底物,可用于活細(xì)胞中鈣離子濃度檢測(cè)、報(bào)告基因分析、BRET(生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移)研究、ELISA、HTS、組織或細(xì)胞中超氧陰離子和過亞硝酸鹽的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)。
與甲蟲熒光素/熒光素酶系統(tǒng)不同,腔腸素/熒光素酶系統(tǒng)不需要三磷酸腺苷(ATP),因此更便于體內(nèi)生物熒光的研究。目前研究得最透徹的以腔腸素為底物的熒光素酶來源于海腎(Renilla), 即海腎熒光素酶 (Renilla Luciferase,簡(jiǎn)稱Rluc)。 活體成像實(shí)驗(yàn)中除FireflyLuciferase外,有時(shí)也會(huì)用到Renilla Luciferase(海腎熒光素酶,編碼基因是Rluc),底物正是coelentarizine。作用原理是以腔腸素為底物的熒光素酶在有分子氧的條件下,氧化腔腸素產(chǎn)生高能量的中間產(chǎn)物, 并在此過程中發(fā)射藍(lán)色光,所發(fā)的光波長(zhǎng)在 460~540nm左右。發(fā)光的波長(zhǎng)低于firefly luciferase的,而且特異性也不好。但是,如果實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)需要標(biāo)記兩種細(xì)胞(比如一種腫瘤細(xì)胞和一種干細(xì)胞)或者標(biāo)記一種細(xì)胞一種基因,就需要有兩種可以分別檢測(cè)的報(bào)告基因。Firefly luciferase和renilla luciferase正好可以滿足這樣的要求,可以分別用不同的底物(D-luciferin,potassium salt和Coelenterazine)分別激活發(fā)光。
腔腸素也是以水母發(fā)光蛋白為代表的海洋發(fā)光蛋白的輔助因子。在一個(gè)以熒光素/熒光素酶系統(tǒng)為基礎(chǔ)略作改變的系統(tǒng)中,水母發(fā)光蛋白穩(wěn)定的結(jié)合了處于反應(yīng)狀態(tài)的腔腸素,氧化反應(yīng)在水母發(fā)光蛋白與鈣離子結(jié)合后開始進(jìn)行。這種對(duì)鈣離子的反應(yīng)是不依賴于氧氣的,水母發(fā)光蛋白所發(fā)射的藍(lán)色光的量和酶濃度及Ca++ 濃度成正比。這種特性使
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