活腫瘤組織凍存試劑盒（LT2601）
組織凍存管 X3
組織支架 X3
組織凍存液：
No.1 玻璃化液 1(V1) …………. 1X10ml 管
No.2 玻璃化液 2(V2) …………. 1X10ml 管
組織凍存流程： 清洗、處理組織→玻璃化液 1、2→液氮玻璃化→儲(chǔ)存
自備材料：
1. 生理鹽水/1XPBS 2. 眼科剪 3. 眼科鑷 4. 有齒鑷 5. 平口鑷 6. 組織處理模具及配套刀片（LT2603） 7. 無(wú)菌液氮 8. 無(wú)菌液氮盒 9. 秒表或計(jì)時(shí)器 10. 100mm 培養(yǎng)皿 X4 11. 無(wú)菌紗布 12. 水浴鍋
操作步驟：
a. 在組織凍存管上記錄清楚腫瘤組織的相關(guān)信息；
b. 水浴加熱并維持玻璃化液 1、玻璃化液 2 為 26℃； 注意：在后續(xù)使用玻璃化液 1、玻璃化液 2 時(shí)，維持液溫為 26℃，有利于提高組織復(fù)蘇后 的存活率。
c. 在 100mm 培養(yǎng)皿中，用生理鹽水清洗腫瘤組織，使用眼科剪、眼科鑷修剪 去除血管、包膜以及壞死組織；
d. 使用組織處理模具將腫瘤組織切成 1mm 厚的薄片； 注意：經(jīng)驗(yàn)證，組織切片的厚度為 1mm。
e. 在 100mm 培養(yǎng)皿中，用生理鹽水再次清洗切好的組織，并用無(wú)菌紗布吸除 組織表面的液體；
f. 使用平口鑷將腫瘤組織切片浸入 V1 管中的 10ml 玻璃化液 1 中，26℃， 25min ；
g. 將 V1 管中的液體及組織切片全部倒入 100mm 培養(yǎng)皿中，在移入 V2 管前使 用無(wú)菌紗布盡量將組織表面的玻璃化液 1 吸除； 注意：盡量減少組織切片從玻璃化液 1 移入玻璃化液 2 之間的操作時(shí)間。
h. 使用平口鑷將組織切片移入 V2 管中的 10ml 玻璃化液 2 中，26℃， 15min 或 者待組織切片自然沉降至管底；
注意：如果組織切片在 15min 內(nèi)沒(méi)有自然沉降至 V2 管的管底，等待至其沉至管底；如果組織切片早于 15min 沉至管底，讓組織切片在 V2 管內(nèi)浸泡至少 15min。
i. 將組織切片平鋪擺放于組織支架上；
j. 將組織支架平放于無(wú)菌紗布上，盡量吸除組織切片表面的液體；
k. 使用有齒鑷將組織支架快速浸入無(wú)菌液氮，時(shí)間不少于 5min； l. 快速將組織支架移入組織凍存管內(nèi)，旋緊凍存管，將凍存管移入液氮罐中保 存。
注意：在組織支架移入組織凍存管前，檢查組織切片是否透明，透明的組織切片意味著組 織切片成功被玻璃化。
活腫瘤組織復(fù)蘇試劑盒（LT2602）
組織復(fù)蘇液：
No.1 復(fù)蘇液 1 (T1) ………………… 1X30ml 管
No.2 復(fù)蘇液 2 (T2) ………………… 1X10ml 管
No.3 復(fù)蘇液 3 (T3) ……………… 1X10ml 管
No.4 復(fù)蘇液 4 (T4) ……………… 1X10ml 管
自備材料：
1. 有齒鑷 2. 平口鑷 3. 無(wú)菌液氮 4. 無(wú)菌液氮盒 5. 秒表或計(jì)時(shí)器 6. 100mm 培養(yǎng)皿 X3 7. 水浴鍋
操作步驟：
a. 水浴加熱并維持復(fù)蘇液 1 為 37℃，復(fù)蘇液 2、3、4 為 26℃； 注意：在后續(xù)使用復(fù)蘇液 1 時(shí)維持液溫為 37℃，復(fù)蘇液 2、3、4 時(shí)維持液溫為 26℃， 有利于提高組織復(fù)蘇后的存活率。
b. 使用有齒鑷在液氮中旋開(kāi)組織凍存管并取出組織支架；
c. 迅速將組織支架沉浸入 37℃的復(fù)蘇液 1 ，并不斷輕搖 T1 管，待組織切 片從組織支架上脫落后，取出支架，讓組織切片浸泡 3min； d. 將 T1 管中的液體及組織切片全部倒入 100mm 培養(yǎng)皿中，使用平口鑷將組 織切片移入 T2 管中的 10ml 復(fù)蘇液 2 中，26℃，5min； e. 將 T2 管中的液體及組織切片全部倒入 100mm 培養(yǎng)皿中，使用平口鑷將組 織切片移入 T3 管中的 10ml 復(fù)蘇液 3 中，26℃，10min； f. 將 T3 管中的液體及組織切片全部倒入 100mm 培養(yǎng)皿中，使用平口鑷將組 織切片移入 T4 管中的 10ml 復(fù)蘇液 4 中，26℃，10min，即獲得復(fù)蘇后 的腫瘤組織； g. 用生理鹽水沖洗后即可移植于免疫缺陷小鼠體內(nèi)建立 PDX 模型，或用于 其他研究。
注意：盡量減少組織切片從一種復(fù)蘇液移入另一種復(fù)蘇液之間的操作時(shí)間。
關(guān)鍵字： PDX；玻璃化凍存；活腫瘤組織凍存；樣本庫(kù)
上?？七h(yuǎn)迪生物科技有限公司成立于2007年，致力于活體生物發(fā)光、熒光成像技術(shù)和醫(yī)學(xué)凍存技術(shù)在中國(guó)的推廣和應(yīng)用！目前在南京、杭州等地有10多家代理商。人民衛(wèi)生出版社2010年出版的《高等學(xué)校創(chuàng)新教材-醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)系列》之《組織學(xué)與胚胎學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)》分冊(cè)首次將活體動(dòng)物體內(nèi)功能成像技術(shù)（該書(shū)第十一章）寫進(jìn)醫(yī)學(xué)院校教材，標(biāo)志著該技術(shù)在國(guó)內(nèi)的普及應(yīng)用又上新臺(tái)階！本公司創(chuàng)始人參與了第十一章 《活體動(dòng)物體內(nèi)功能成像技術(shù)》的編寫工作！本公司與交通大學(xué)第六人民醫(yī)院合作完成的 《活體生物發(fā)光成像技術(shù)及其在消化道研究領(lǐng)域中的應(yīng)用》一文發(fā)表在《胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志》2010年第四期，本項(xiàng)目由上海市自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.04ZB14072) 資助。本公司與浙江大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院李繼承教授，李冬梅博士合作完成的《小動(dòng)物活體成像技術(shù)研究進(jìn)展》一文發(fā)表在《中國(guó)生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)報(bào)》2009,28(6):916-921。? ? 我們經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的實(shí)驗(yàn)研究與反復(fù)驗(yàn)證，研發(fā)出一系列Livecyte?即用型細(xì)胞凍存液系列產(chǎn)品，能有效地提高常規(guī)細(xì)胞、原代細(xì)胞與干細(xì)胞的復(fù)蘇后存活率與活力。產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定可靠、使用方便，助力科研工作者擺脫程序繁瑣、操作復(fù)雜、容易污染的傳統(tǒng)凍存方法，專注于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。該系