超敏型 ECL化學(xué)發(fā)光底物試劑盒

Super-sensitive Enhanced Chemiluminescence Substrate Kit

試劑盒組成：

儲(chǔ)存：避光保存，室溫可保持穩(wěn)定兩年以上；長(zhǎng)期不用，建議置于4 oC保存延長(zhǎng)有效期。

一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本試劑盒是化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)，用于檢測(cè)固定在膜上的蛋白或核酸，靈敏度高，背景低，最低檢測(cè)靈敏度可達(dá)高飛克(femtogram)級(jí)，適用于檢測(cè)痕量蛋白或核酸。發(fā)光信號(hào)持久，所采用的獨(dú)特配方足以維持6小時(shí)以上的發(fā)光，便于反復(fù)曝光操作。與普通 ECL 化學(xué)發(fā)光底物相比，可明顯減少一抗和二抗的使用量。

二、原理：

超敏型ECL化學(xué)發(fā)光底物試劑盒用于檢測(cè)直接或間接標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶（HRP）的抗體、抗原或者核酸。蛋白質(zhì)或核酸在電泳后轉(zhuǎn)移到印跡膜上，以HRP標(biāo)記的抗體或探針結(jié)合膜上的目的蛋白或核酸，洗膜后置于用本產(chǎn)品配制的ECL工作液中，室溫孵育數(shù)分鐘，HRP使工作液中的魯米諾（Luminol）氧化并發(fā)光，試劑中添加的增強(qiáng)劑可以使得這種發(fā)光大大增強(qiáng)。此光經(jīng)X光膠片或者電子裝置感光記錄下來(lái)，可清晰顯示蛋白質(zhì)或核酸條帶。

三、產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)：

高飛克級(jí)靈敏度——高靈敏性，能快速檢測(cè)更廣泛的蛋白范圍，最低可檢測(cè)約300飛克的蛋白量。

信號(hào)穩(wěn)定——發(fā)光時(shí)間長(zhǎng)，能進(jìn)行多次曝光，30min后仍可維持約90%的發(fā)光強(qiáng)度，6小時(shí)后仍能維持60%以上的發(fā)光強(qiáng)度。

信號(hào)強(qiáng)——發(fā)光信號(hào)比對(duì)碘苯酚增強(qiáng)的 HRP-魯米諾檢測(cè)體系更強(qiáng)。

穩(wěn)定性高——試劑盒可在室溫長(zhǎng)期穩(wěn)定存放。

節(jié)約抗體——需要更少（稀釋更多）的一抗和二抗，特別節(jié)省抗體(推薦用量：一抗0.02-1.0 μg/mL，二抗4-20 ng/mL)。

四、使用方法：

1. 印跡膜制備：執(zhí)行常規(guī)電泳、轉(zhuǎn)膜、HRP標(biāo)記的抗體或者HRP標(biāo)記的核酸探針?lè)跤?、洗膜；ECL工作液含有HRP催化的發(fā)光底物，檢測(cè)系統(tǒng)必須基于HRP酶標(biāo)記的抗體或者核酸探針。充分的洗滌對(duì)于降低背景非常重要，所有步驟均在室溫下完成。

2. ECL工作液的配置：在使用前取等量A液和B液，混合均勻并盡快使用；將膜片置混合液中，于室溫下孵育約1分鐘，每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2 ml以覆蓋全膜片，注意不要在膜片表面形成氣泡。

3.蛋白或核酸信號(hào)顯現(xiàn)：

1). 用平頭鑷鉗住膜片，垂直置于吸水紙上以吸去過(guò)量試劑，僅留下少量液體覆蓋表面，不可讓膜完全干燥；

2). 將膜片置于保鮮膜上，吸附蛋白面朝上，小心趕盡氣泡；

3). 用電子裝置感光，或在暗室中用X光片曝光；

4). 根據(jù)信號(hào)強(qiáng)弱適當(dāng)調(diào)整曝光時(shí)間，也可選擇不同時(shí)間多次曝光，以取得效果。

五、安全性：

無(wú)特殊毒性，按普通化學(xué)品處理。如果不慎與眼、皮膚和衣物接觸，請(qǐng)立刻用大量清水沖洗。

六、注意事項(xiàng)：

1．由于不同品牌的抗體質(zhì)量不同，以及抗體的保存條件和保存時(shí)間的不同，初次使用時(shí)建議對(duì)抗體用量進(jìn)行優(yōu)化，以取得效果。

2．勿將ECL化學(xué)發(fā)光底物試劑盒暴露在陽(yáng)光或強(qiáng)光下，否則會(huì)導(dǎo)致其失活；建議保存在棕色瓶中，并避免長(zhǎng)時(shí)間暴露在陽(yáng)光下，實(shí)驗(yàn)室光照對(duì)試劑盒影響不大；除了X光膠片曝光和洗片處理外，所有步驟均不必在暗室中操作。

3．使用充足的洗滌緩沖液、封閉液、抗體稀釋液和底物工作液去覆蓋印跡膜，以確保印跡膜處于濕潤(rùn)狀態(tài)；使用大量的封閉液和洗滌液能減少非特異性信號(hào)的產(chǎn)生。

4．使用前配制ECL工作液，體積足夠覆蓋膜片即可；取A液和B液時(shí)一定要用不同的槍頭，互相污染可能導(dǎo)致緩慢失活；配制完畢建議立即使用工作液，室溫放置數(shù)小時(shí)后仍可使用但靈敏度略有降低；棄去使用過(guò)的混合試劑；

5．印跡膜與ECL工作液孵育后約2 min時(shí)發(fā)出的光最強(qiáng)，然后隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而緩慢減弱，至30 min仍可保持90%的光信號(hào)，至24小時(shí)仍可保持約60%的光信號(hào)；蛋白點(diǎn)熒光較弱時(shí)可以適當(dāng)延長(zhǎng)曝光時(shí)間；使用過(guò)少的ECL工作液不利反應(yīng)進(jìn)行，為達(dá)節(jié)約目的可將膜剪小，但勿降低ECL工作液使用比例。

6．使用生物素/親和素體系時(shí)，避免使用脫脂奶粉作為封閉液，因?yàn)槊撝谭壑泻卸喾N內(nèi)源性生物素，容易產(chǎn)生非特異性信號(hào)。

7. 避免將多張膜置于同一個(gè)洗膜盒內(nèi)洗膜，相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。

8. 金屬氧化物顆粒可能會(huì)造成膜上出現(xiàn)顆粒狀斑點(diǎn)，避免使用帶有銹跡的剪刀以及鑷子，建議使用塑料的平頭鑷子。

9．疊氮化鈉（NaN3）能抑制HRP活性，應(yīng)避免使用NaN3，如必須使用，濃度不要超過(guò)0.01%。

10. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作；戴手套可以避免在膜上留下手印，保持膜的干凈。

11．本產(chǎn)品僅供研究使用。

相關(guān)產(chǎn)品：

BCA蛋白定量試劑盒，貨號(hào)：PD-BCA-125，PD-BCA-500

極敏型 ECL化學(xué)發(fā)光底物試劑盒，貨號(hào)：ECL-F-100，ECL-F-500