本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)為 EGFR（T790M）基因突變型 DNA 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，可作為測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)用于 EGFR.T790M基因突變定性和定量測(cè)量結(jié)果溯源、測(cè)量方法驗(yàn)證評(píng)價(jià)以及實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制。?

一、樣品制備?

本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)為 CRISPR/Cas9 基因編輯技術(shù)獲得 EGFR_T790M 突變的細(xì)胞株提取的基因組 DNA經(jīng)酶切片段處理成長(zhǎng)度 144bp-176bp 不等的候選材料，后在潔凈環(huán)境條件下，采用重量法配制而成。?

二、溯源性及定值方法?

采用絕對(duì)定量方法-數(shù)字 PCR 方法，以 8 家實(shí)驗(yàn)室聯(lián)合定值模式對(duì) EGFR_T790M 突變基因及對(duì)應(yīng)野生型基因拷貝數(shù)濃度測(cè)定，作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)拷貝數(shù)濃度的標(biāo)準(zhǔn)值；突變基因拷貝數(shù)和野生型基因拷貝數(shù)比值作為突變豐度標(biāo)準(zhǔn)值。通過使用滿足計(jì)量學(xué)特性要求、經(jīng)確認(rèn)的絕對(duì)定量測(cè)量方法和經(jīng)檢定/校準(zhǔn)的容量計(jì)量器具，確保本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的量值溯源至可作為任何一個(gè)量制基本單位的實(shí)體數(shù)基本單位“一”（符號(hào)：1）以及體積的國(guó)家法定計(jì)量單位升（L）。?

三、特性量值及不確定度

所賦特性量值的不確定度由定值測(cè)量、均勻性和穩(wěn)定性等引入的不確定度分量合成得到。?

四、均勻性及穩(wěn)定性評(píng)估?

參照 JJF1343 國(guó)家計(jì)量技術(shù)規(guī)范（等效 ISO 指南 35），采用數(shù)字 PCR 方法對(duì)該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行均勻性檢驗(yàn)研究，結(jié)果表明均勻性良好，最小取樣量 5 μL。采用數(shù)字 PCR 方法對(duì)該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行了初步穩(wěn)定性研究，參考同類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)，本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)自定值日期起，有效期暫定為 12 個(gè)月，研制單位將繼續(xù)跟蹤監(jiān)測(cè)該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的穩(wěn)定性，有效期內(nèi)如發(fā)現(xiàn)量值變化，將及時(shí)通知用戶。?

五、包裝、貯存及使用?

1.包裝規(guī)格：本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)采用 0.5 mL 帶內(nèi)蓋彩色凍存管包裝，每管 20 μL。?

2.保存條件及運(yùn)輸：置于-70℃冰箱中保存。.采用干冰運(yùn)輸，收到標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)后應(yīng)檢查標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是否處于冰凍狀態(tài)。檢查無誤才可用于實(shí)驗(yàn)。?

3.使用注意事項(xiàng)：本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)開瓶后一次性使用，不建議反復(fù)凍融。使用前應(yīng)先從冰箱內(nèi)取出，平衡至室溫并混勻。