【嘉美生物】成立于1896年的羅氏公司是以研究為導(dǎo)向的健康事業(yè)公司，總部位于瑞士巴塞爾。經(jīng)過(guò)百年的歷程，羅氏在眾多領(lǐng)域已成為全球的領(lǐng)先者，比如說(shuō)全球診斷領(lǐng)域排名；全球腫瘤領(lǐng)域排名；全球生物科技領(lǐng)域排名第二。羅氏公司應(yīng)用科學(xué)部致力于生命科學(xué)領(lǐng)域產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)， 1998年收購(gòu)德國(guó)寶靈曼（Boehringer Mannheim）公司后，Roche的產(chǎn)品涵蓋了分子生物學(xué)，細(xì)胞學(xué)，免疫學(xué)，蛋白質(zhì)組學(xué)，生物化學(xué)等多個(gè)研究領(lǐng)域。羅氏擁有PCR以及地高辛標(biāo)記產(chǎn)品的全球?qū)＠?，其DIG標(biāo)記產(chǎn)品和細(xì)胞凋亡相關(guān)產(chǎn)品在業(yè)內(nèi)享有極高的聲譽(yù)。

一、獨(dú)一無(wú)二的非脂質(zhì)體型FuGENE 6
在轉(zhuǎn)染方面，Roche的王牌產(chǎn)品FuGENE 6同樣享有極佳的聲譽(yù)。這個(gè)早在上世紀(jì)90年代中期由寶靈曼研發(fā)的王牌產(chǎn)品歷時(shí)多年，依然是當(dāng)今轉(zhuǎn)染領(lǐng)域用的產(chǎn)品之一。在2004年度產(chǎn)品評(píng)選活動(dòng)中FuGENE 6當(dāng)選2004年度最值得信賴試劑產(chǎn)品，一位投票人在推薦理由中這樣寫(xiě)到：“從未令我失望過(guò)。”確實(shí)，我自己以前也曾經(jīng)試過(guò)在同樣條件下用Clonfectin、Lipofectamine等幾個(gè)轉(zhuǎn)染試劑同時(shí)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)室里3種不同的細(xì)胞株，暫且不說(shuō)實(shí)驗(yàn)的復(fù)雜程度和轉(zhuǎn)染效率高低——單說(shuō)這轉(zhuǎn)染后報(bào)告基因表達(dá)效果，鏡下檢查FuGENE轉(zhuǎn)染的細(xì)胞的綠色熒光都是最明亮，也是最多的。對(duì)于做表達(dá)的人來(lái)說(shuō)，夫復(fù)何求？當(dāng)然，這并不排除有細(xì)胞株的影響因素在內(nèi)。

特點(diǎn)：
FuGENE 6是一種非脂質(zhì)體型（non-liposomal）轉(zhuǎn)染試劑，由專利配方的脂質(zhì)混合體（lipids）和特定成分組成，通過(guò)加入的創(chuàng)新性組分，在增加核酸穩(wěn)定性的同時(shí)，提高轉(zhuǎn)染試劑－DNA復(fù)合體穿越細(xì)胞膜的效率；而這一過(guò)程速度的提高，預(yù)示了將整個(gè)轉(zhuǎn)染過(guò)程對(duì)正常細(xì)胞生理功能的影響減到最小。這些是陽(yáng)離子脂質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑所不能達(dá)到的。轉(zhuǎn)染試劑-DNA復(fù)合物可以直接加入細(xì)胞培養(yǎng)基中，有血清也不怕，而且轉(zhuǎn)染前后都不需要更換培養(yǎng)基，不用去除轉(zhuǎn)染試劑。FuGENE 6的細(xì)胞毒性很小，每一批產(chǎn)品出廠前都要經(jīng)過(guò)嚴(yán)格質(zhì)控，其中就包括在有血清存在且無(wú)需更換培養(yǎng)基的情況下， COS-1細(xì)胞與FuGENE6轉(zhuǎn)染液或FuGENE6-DNA復(fù)合體溫育26小時(shí),PI染色后流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞存活率必須在95%以上!

適用的細(xì)胞系范圍:
FuGENE 6的細(xì)胞毒性很小，可轉(zhuǎn)染細(xì)胞系范圍非常廣泛，到目前為止已經(jīng)超過(guò)750多種，范圍之廣無(wú)人能及，其中還包括90多種原代細(xì)胞和部分不易轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株/系。Roche的網(wǎng)站也做得十分貼心，如果你想查一下你手頭的細(xì)胞株是否在這成功轉(zhuǎn)染的列表中，可以訪問(wèn)（http://www.roche-applied-science.com/sis/fugene/），不單可以檢索，還有詳細(xì)的列表和Reference——如果不在其中，你可以根據(jù)其他成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞信息來(lái)判斷自己的是否值得去嘗試。不管怎么說(shuō)，F(xiàn)uGENE 6一般都可以滿足你的需求。

轉(zhuǎn)染核酸范圍和大小:
FuGENE 6轉(zhuǎn)染試劑不單可用于常規(guī)的DNA轉(zhuǎn)染，還可用于長(zhǎng)達(dá)10kb的大片段DNA, 寡聚核苷酸及核苷酸的高效轉(zhuǎn)染，操作簡(jiǎn)便，不需要特殊的優(yōu)化過(guò)程，大大減少試驗(yàn)中的操作步驟，適用于高通量檢測(cè)方面的應(yīng)用。但是，F(xiàn)uGENE 6 確乎不建議用在RNA或者siRNA轉(zhuǎn)染上，在RNAi風(fēng)行的今天確實(shí)是個(gè)遺憾。要用FuGENE 6 做RNAi，你只好用siRNA表達(dá)質(zhì)粒載體了。

操作流程:
FuGENE 6的操作也是非常簡(jiǎn)便的（6孔板操作方案）
1、培養(yǎng)細(xì)胞計(jì)數(shù)鋪板在含血清，但不含抗生素的正常培養(yǎng)基中，到轉(zhuǎn)染當(dāng)天50%—80%匯片。
2、FuGENE 6在室溫化凍后混勻后取3－6ul，用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋到100ul，混勻孵育5分鐘
3、按照轉(zhuǎn)染試劑:DNA(ug)比例3:1直接加入DNA，混勻并孵育15分鐘以上。（孵育較長(zhǎng)的時(shí)間，比如30min-60min，有助于提高某些細(xì)胞株的轉(zhuǎn)染效率，但不超過(guò)2小時(shí)為宜）
4、逐滴加入培養(yǎng)細(xì)胞的6孔板中，培養(yǎng)細(xì)胞1－3天檢查結(jié)果。
由于操作步驟簡(jiǎn)便，F(xiàn)uGENE 6 轉(zhuǎn)染方案很容易放大，也很適合進(jìn)行高通量篩選。

用量和價(jià)格：
價(jià)格和包裝大小永遠(yuǎn)是實(shí)驗(yàn)室關(guān)注的重要因素。其實(shí)不單這個(gè)，每次的用量和成本，也就是一個(gè)包裝可用的次數(shù)也應(yīng)該是我們所關(guān)注的。FuGENE 6的價(jià)格1ml298美元，大概￥3000出頭，千萬(wàn)別以為很貴，F(xiàn)uGENE 6的用量很省的，同樣條件用量比別家少一大半以上－－你要知道，按照6孔板轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)來(lái)計(jì)算，每次只需要3－6ul，1ml FuGENE 6足夠做300次6孔板轉(zhuǎn)染！而其他有些主流品牌起碼要10－24ul/次6孔板 呢！這里要特別注意，F(xiàn)uGENE 6產(chǎn)品標(biāo)注的可用轉(zhuǎn)染次數(shù)是以6孔板為標(biāo)準(zhǔn)的，而有些品牌是以24孔板為基礎(chǔ)，二者沒(méi)有可比性，因?yàn)?孔板每孔面積比24孔板大5倍，所以，千萬(wàn)別以為1ml不如人家包裝大啦，其實(shí)每次的成本是很節(jié)約的，能用的次數(shù)其實(shí)還要更多呢！在進(jìn)口產(chǎn)品中這個(gè)價(jià)格相當(dāng)實(shí)惠的！濃縮才是精華，再加上FuGENE 6的良好性能，這么多年來(lái)依然笑傲江湖，自然有它的道理。

注意事項(xiàng)：
FuGENE 6要求的轉(zhuǎn)染時(shí)鋪板密度在50％－80％間。由于轉(zhuǎn)染試劑保存在80％乙醇中，F(xiàn)uGENE 6平時(shí)應(yīng)該保存在-20度，在4度條件下可以只能穩(wěn)定3周而不影響活性。由于有乙醇保護(hù)，反復(fù)化凍開(kāi)蓋不會(huì)導(dǎo)致氧化所以不影響活性，所以不要分裝FuGENE 6！不均勻的黏附到新的管壁上反而影響試劑穩(wěn)定！另外要注意使用前必須完全化凍到室溫，并且要振蕩1秒以充分混勻才可以取樣稀釋。稀釋時(shí)要特別注意將tips插入無(wú)血清培養(yǎng)基中迅速吹打混勻，不要靠壁或者只在液面吹打，防止脂質(zhì)成分平鋪在培養(yǎng)基表面而影響復(fù)合物形成。千萬(wàn)不要先加轉(zhuǎn)染試劑再加無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋，切記。FuGENE 6 很怕某些塑料表面的（只有Tips和原裝管子那種塑料安全），可能里面的脂質(zhì)會(huì)有反應(yīng)吧。

同樣的，稀釋用培養(yǎng)基必須是無(wú)血清培養(yǎng)基，從而保證轉(zhuǎn)染試劑-DNA復(fù)合物形成。由于轉(zhuǎn)染試劑可能會(huì)將抗生素帶入細(xì)胞或者增加細(xì)胞通透性而影響細(xì)胞存活率，所以要求用不添加抗生素的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，即使要用抗生素篩選，也要至少培養(yǎng)足夠的時(shí)間讓抗性基因表達(dá)后再換篩選培養(yǎng)基。細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)血清的存在不影響轉(zhuǎn)染效果，甚至，實(shí)驗(yàn)表明在有血清的培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)染而且不更換培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)化效率還好一點(diǎn)點(diǎn)。

DNA的低內(nèi)毒素的，因?yàn)槟承┘?xì)胞株對(duì)內(nèi)毒素敏感。精確定量DNA，保證轉(zhuǎn)染試劑(ul)和DNA(ug)比例3：1。Carrier DNA可免則免，如果非要加不可，那就多加些轉(zhuǎn)染試劑，保證3:1的總DNA量。反正FuGENE 6 毒性小，多加些也不會(huì)毒死細(xì)胞的。某些細(xì)胞株如果表達(dá)不好或者轉(zhuǎn)染效率不高還可以試試同時(shí)按比例增加轉(zhuǎn)染試劑和DNA的量，往往有幫助。

二、一個(gè)強(qiáng)過(guò)一個(gè)的D家兩姐妹
DOTAP和DOSPER可算得上是久經(jīng)考驗(yàn)的古董級(jí)的老產(chǎn)品了，操作簡(jiǎn)便，“內(nèi)外兼修”的DOTAP作為單價(jià)陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，主要特點(diǎn)是轉(zhuǎn)染效率高，對(duì)細(xì)胞毒性小。DOTAP可以吸附帶負(fù)電荷的DNA、 RNA、寡核苷酸、核蛋白以及其他的大分子轉(zhuǎn)染到真核細(xì)胞中，對(duì)大多數(shù)細(xì)胞株的轉(zhuǎn)染效率普遍要比傳統(tǒng)的磷酸鈣和DETA－葡聚糖的方法高5－100倍，而且，DOTAP除了可以進(jìn)行體外操作外，還可以進(jìn)行體內(nèi)操作，因此目前已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于在非人類的動(dòng)物模型基礎(chǔ)上的基因治療的研究中。此外，決定選擇DOTAP的實(shí)驗(yàn)室人員還有一個(gè)原因，那就是DOTAP可以在混合物中有或沒(méi)有血清的情況高效轉(zhuǎn)染，這為一些需要血清“保護(hù)”的細(xì)胞株的轉(zhuǎn)染提供了方便。

DOTAP轉(zhuǎn)染試劑固然好用，但是它的“妹妹”DOSPER轉(zhuǎn)染試劑的設(shè)計(jì)更為巧妙。DOSPER試劑是經(jīng)改進(jìn)的多價(jià)陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑（polycationic lipid）。與DOTAP 不同，DOSPER的脂肪酸連接到了丙烷骨架的1、3位，這一特殊的結(jié)構(gòu)可以使得DOSPER可以在較低的濃度下發(fā)揮作用 （DOTAP所需比例為5—10ug /ug DNA，DOSPER為2—10ug/ug DNA），從而減小對(duì)細(xì)胞本身的損傷，帶來(lái)更好的轉(zhuǎn)染試驗(yàn)結(jié)果，適用于某些不易轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株?？芍^一半用量，雙倍效果。

三、各有專攻的X兄弟
RNA干擾技術(shù)已經(jīng)成為了研究基因功能的有力工具，任何一個(gè)RNA interference實(shí)驗(yàn)的成功都有賴于轉(zhuǎn)染試劑的選擇，沒(méi)有高效的轉(zhuǎn)染，siRNA就不能有效的引發(fā)相應(yīng)的細(xì)胞響應(yīng)，會(huì)直接影響同一siRNA的抑制效果。為了彌補(bǔ)FuGENE 6 不能轉(zhuǎn)染siRNA的遺憾，近期羅氏推出了X－tremeGENE siRNA Transfection Reagent，這種轉(zhuǎn)染試劑專門(mén)針對(duì)siRNA的轉(zhuǎn)染（包括siRNA直接疽約皊iRNA和表達(dá)質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染），比較于同類產(chǎn)品來(lái)說(shuō)，主要優(yōu)勢(shì)一是有效的基因敲除（gene knockdown）效果（見(jiàn)下圖），其次是其兼容性，因?yàn)閄-tremeGENE siRNA Transfection Reagent可以用于siRNA直接轉(zhuǎn)染以及siRNA和表達(dá)質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染。第三就是它可以高效轉(zhuǎn)染常見(jiàn)的哺乳動(dòng)物的細(xì)胞株及部分不易轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株，而且對(duì)細(xì)胞的毒性和物理破損低，X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent操作簡(jiǎn)便，反應(yīng)前后無(wú)需更換介質(zhì)。siRNA專用的轉(zhuǎn)染產(chǎn)品經(jīng)過(guò)專門(mén)優(yōu)化，應(yīng)該優(yōu)于多功能轉(zhuǎn)染試劑，而且產(chǎn)品具有很高的性價(jià)比，每個(gè)反應(yīng)僅需要約0.40美金（1ml可做400次24孔板）。

除此之外，羅氏也提供了一種X-tremeGENE siRNA Dicer Kit，進(jìn)一步方便了siRNA轉(zhuǎn)染，這一試劑盒模擬了細(xì)胞RNAi的途徑－－利用Dicer RNase將雙鏈RNAs加工成小的21—24bp的小分子雙鏈RNA斷片段，體外生成d-siRNA，這樣就可以在短時(shí)間內(nèi)準(zhǔn)備好更有效的siRNA用于轉(zhuǎn)染。

“術(shù)業(yè)有專攻”的X-tremeGENE Q2轉(zhuǎn)染試劑則是專門(mén)針對(duì)Hela, K-562和Jurkat細(xì)胞而優(yōu)化設(shè)計(jì)的，可以有效提高轉(zhuǎn)染后蛋白表達(dá)，適用于在這幾類細(xì)胞中大量蛋白表達(dá)研究。

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