產(chǎn)品名稱:犬利什曼原蟲染料法熒光定量PCR試劑盒
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本產(chǎn)品是以染料法熒光定量PCR技術為基礎開發(fā)的PCR試劑盒,它具有下列特點:
1.即開即用,用戶只需要提供樣品DNA模板。
2.引物等組分經(jīng)過優(yōu)化,靈敏度高。
3.提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4.特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設計,不會跟其他的DNA/RNA發(fā)生交叉反應。
5.既可用于定性檢測,又可用于定量檢測。用于定量檢測時線性范圍至少為5個數(shù)量級。
6.本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的染料法熒光定量PCR反應。
犬利什曼原蟲染料法熒光定量PCR試劑盒操作方法
一、制備標準曲線樣品(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。
1.標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
2.用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液,最好用帶芯槍頭,下同)。
3.在7號管中加入5 μL 陽性對照(其濃度為1×10E8拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
4.換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
5.換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
6.重復上面的操作直到得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
1.用自選方法純化樣品的DNA,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
2.如果有N個樣品,則需要進行N+2個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置qPCR反應(20μL體系,在樣品制備室進行)
如果進行定量分析,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于標準曲線樣品。如果做定性分析,則6個標準曲線樣品只選一個做(可以選4號,其余樣品不變)。以下只介紹定量分析的反應設置。
【樣品要求】
1. 根據(jù)實際情況采樣,胃液分泌物、胃液嘔吐物以及樣品培養(yǎng)物作為檢測樣本,具體參考《臨床微生物樣本采集規(guī)范》。
2. 應避免樣本間交叉污染,樣本采集后應及時檢測,也可保存于-20±5℃待檢,長期保存應置于-70℃以下。
【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、運輸、反復凍融少于 7 次,有效期 12 個月。
犬利什曼原蟲染料法熒光定量PCR試劑盒檢測方法的局限性
1樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關;
2 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現(xiàn)假陽性結(jié)果;
3 陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏,會導致假陽性結(jié)果;
4 病原體在流行過程中基因突變、重組,會導致假陰性結(jié)果;
5 不同的提取方法存在提取效率差異,會導致假陰性結(jié)果;
6 試劑運輸,保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結(jié)果;
7本檢測結(jié)果僅供參考,如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。
犬利什曼原蟲染料法熒光定量PCR試劑盒注意事項
1 所有操作嚴格按照說明書進行;
2 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應自然融化,完全混勻并短暫離心;
3 反應液應避光保存;
4反應中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;
5 使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服;
6樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行,以免交叉污染;
7實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;
犬利什曼原蟲染料法熒光定量PCR試劑盒相關產(chǎn)品如下:
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關鍵字: 犬利什曼原蟲染料法熒光定量PCR試劑盒;Canine Leishmaniosis;犬利什曼原蟲染料法熒光定量PCR試劑盒;晶風PCR試劑盒;染料PCR檢測試劑盒;
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