基于qPCR 檢測(cè)技術(shù)的miRNA 表達(dá)及差異分析是對(duì)測(cè)序、芯片結(jié)果的有效補(bǔ)充與驗(yàn)證，是進(jìn)一步確定研究對(duì)象并做后續(xù)功能研究或生物標(biāo)志物篩選的基礎(chǔ)。
銳博生物專利：高靈敏度小RNA定量檢測(cè)方法及試劑盒. 授權(quán)專利號(hào)：CA201410039162.6
Bulge-Loop? miRNA qRT-PCR
1、高特異性，采用具有莖凸環(huán)結(jié)構(gòu)的逆轉(zhuǎn)錄引物以和高特異miRNA正向引物，確保該方法的特異性，能準(zhǔn)確檢測(cè)出高度同源的miRNA
2、高靈敏度，比傳統(tǒng)的miRNA 定量檢測(cè)方法具有更寬廣的動(dòng)態(tài)變化范圍，無需擔(dān)心因樣品量少或者miRNA 表達(dá)量低而無法精確檢測(cè)
3、高準(zhǔn)確性，可驗(yàn)證微陣列表達(dá)譜數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，有效地檢測(cè)出miRNA 表達(dá)量，且重復(fù)性高。
Bulge-Loop miRNA頸環(huán)法引物套裝包括：Bulge-Loop RT primer、Forward primer和Reverse primer。
miDETECT A Track? miRNA qRT-PCR
1、靈敏度高，精確定量miRNA表達(dá)量
2、特異性好，甚至可準(zhǔn)確區(qū)分miRNA 成熟鏈和前體
3、節(jié)省樣本，一次轉(zhuǎn)錄可同時(shí)檢測(cè)多種miRNA 及其他各種RNA
4、適用于各種樣品的miRNA 表達(dá)譜檢測(cè)
miDETECT A miRNA加尾法引物：Forward Primer。
miDETECT A Track? miRNA qRT-PCR能夠準(zhǔn)確檢測(cè)miRNA表達(dá)量，并在較寬的定量區(qū)間內(nèi)得到很好的標(biāo)準(zhǔn)曲線，檢測(cè)限度從1fM 至100pM，適合進(jìn)行miRNA 準(zhǔn)確定量檢測(cè)。
以 6 個(gè)數(shù)量級(jí)連續(xù)梯度（1fM, 10fM, 100fM, 1pM, 10pM, 100pM）稀釋的miRNA 標(biāo)準(zhǔn)品（hsa-miR-16、hsa-miR-21）進(jìn)行miDETECT A Track? miRNA qRT-PCR 檢測(cè)，每個(gè)梯度3 個(gè)平行樣，擴(kuò)增效率（E）超過96%，檢測(cè)相關(guān)性（R2）達(dá)到1.00，靈敏、準(zhǔn)確。
miDETECT A Track? miRNA qRT-PCR 采用特異性優(yōu)化的設(shè)計(jì)算法，能夠?qū)蝹€(gè)樣品中的多種RNA 通過通用的Poly(A) Tailing 和Uni-RT 反應(yīng)，及特異性qPCR 檢測(cè)，可準(zhǔn)確區(qū)分序列相似的miRNA 成熟鏈，重復(fù)性好，可信度高，甚至能區(qū)分大部分成熟體和前體。
分別以8 個(gè)10pM 的miDETECT? miRNA qRT-PCR Standard RNA 為模板，采用8 種miDETECT A Track? miRNA引物進(jìn)行特異性qRT-PCR 檢測(cè)，結(jié)果表明僅對(duì)應(yīng)的miRNA 引物能夠特異性檢測(cè)，無非特異性擴(kuò)增現(xiàn)象出現(xiàn)。
A：miDETECT A Track? miRNA qRT-PCR 檢測(cè)擴(kuò)增曲線; B：引物特異性統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果
由于對(duì)樣品進(jìn)行的Poly(A) Tailling 和Uni-RT 具有通用性，所以經(jīng)過一次反轉(zhuǎn)錄得到的產(chǎn)物即可檢測(cè)mature miRNA、miRNA precursor、snoRNA、snRNA、piRNA、lncRNA 和mRNA ( 注：引物需要特殊設(shè)計(jì)) 等多種RNA，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確且重復(fù)性高。
樣品中總RNA 采用miDETECT A Track? miRNA qRT-PCR 方法檢測(cè)miRNA(hsa-miR-638、hsa-miR-760、hsa-miR-1207、hsa-miR-4281)，snRNA(U6)，lncRNA(7SL1) 為模板，準(zhǔn)確定量檢測(cè)多種RNA 的表達(dá)量。