品名：Smart-antibody? Protein A抗體純化試劑盒，貨號：P4143，品牌：Engibody
訂購及技術(shù)咨詢：朱小鷗，13817407320(微信同號)
保姆級抗體純化試劑盒（Protein A法）
Smart-antibody?
Protein A抗體純化試劑盒的優(yōu)勢
1、本試劑盒可以純化來自腹水，血清，細(xì)胞培養(yǎng)物上清等樣本形式的抗體。
2、試劑盒中的Protein A純化填料可以重復(fù)使用10次以上，偶聯(lián)在瓊脂糖珠上的Protein A是純化人、兔、豬、狗或貓IgG（單克隆及多克隆）的理想選擇，高特異性，高穩(wěn)定性，高親和力，低配基脫落。
3、本試劑盒是一個(gè)Complete All-In-One Kit — 包含全部試劑及耗材，高效結(jié)合緩沖液、平衡緩沖液、洗滌緩沖液、洗脫緩沖液、中和液、protein A填料、重力空柱（帶控流閥）、脫鹽濃縮柱、抗體儲存液、以及下游WB檢測所需的高特異性山羊抗兔二抗（HRP標(biāo)記）。
第一部分：背景簡介及應(yīng)用場景
Protein A、Protein G與抗體的結(jié)合特性比較
1、Protein A Agarose Resin 6FF、rProtein A Agarose Resin 6FF與抗體的結(jié)合
目前，約70-80%的抗體純化使用Protein A及Protein G親和層析。蛋白A (Protein A)來源于金黃色葡萄球菌的一個(gè)株系，它含有5個(gè)可以和抗體lgG分子的Fc段特異性結(jié)合的結(jié)構(gòu)域。蛋白A作為親和配基被偶聯(lián)到瓊脂糖基質(zhì)上，可以特異性的和樣品中的抗體分子結(jié)合，而使其他雜蛋白流穿，具有極高的選擇性，一步親和層析就可達(dá)到超過95%的純度。
天然的Protein A有5個(gè)IgG結(jié)合結(jié)構(gòu)域和未知功能的非Fc結(jié)合域，結(jié)構(gòu)示意圖如下：
此結(jié)構(gòu)的蛋白A大量結(jié)合IgG的同時(shí)，其非Fc結(jié)合域能結(jié)合部分雜蛋白，導(dǎo)致洗脫下來的IgG純度不夠，因此科學(xué)家利用基因工程的方法克隆Protein A的基因并進(jìn)行改造，得到重組型蛋白A，其非特異性結(jié)合明顯降低。重組的蛋白A經(jīng)過改造后在C端加入了一個(gè)半胱氨酸，可以定點(diǎn)偶聯(lián)到瓊脂糖珠上，降低空間位阻的同時(shí)提高IgG的結(jié)合能力。一步親和層析后樣品純度可超過95%。
但蛋白A與lgG的結(jié)合強(qiáng)度很大程度上依賴于該抗體的種屬和亞型，而其動態(tài)結(jié)合能力則決定于結(jié)合強(qiáng)度(解離常數(shù))及流質(zhì)阻力等多種因素(例如上樣時(shí)樣品在柱內(nèi)的停留時(shí)間)。
本試劑盒中使用的即是優(yōu)化重組的蛋白A (rProtein A)偶聯(lián)的Agarose Resin 6FF
2、Protein G Agarose Resin 6FF與抗體的結(jié)合
蛋白G是一種源自鏈球菌G族的細(xì)胞表面蛋白，為三型Fc受體。其通過類似于蛋白A的非免疫機(jī)制與抗體的Fc段結(jié)合。像蛋白A一樣，蛋白G可以與IgG的Fc區(qū)域特異性結(jié)合，不同的是，Protein G可以更廣泛、更強(qiáng)地結(jié)合更多類型的lgG, 同時(shí)血清蛋白結(jié)合水平更低，純度更高，配基脫落也相對更低。此外，蛋白G還可以和某些抗體的Fab和F (ab)2段結(jié)合。
與蛋白G相比，蛋白A對兔、豬、狗和貓的IgG亞類提供了最高的結(jié)合能力。除IgG3外，蛋白A對人IgG也具有更高的結(jié)合能力，人IgG3結(jié)合較弱。另外，蛋白A與小鼠IgG1結(jié)合較弱，不推薦用于該抗體類型的大多數(shù)應(yīng)用。
Engibody品牌Protein A填料的優(yōu)勢：
貨號：P2108，品名：Protein A Agarose Resin 6FF
1、Protein A經(jīng)過了序列優(yōu)化并進(jìn)行了重組表達(dá)，protein A與瓊脂糖微球偶聯(lián)時(shí)用的是氨基酸序列C末端最后一個(gè)半胱氨酸（基因工程改造得到的），因?yàn)榘腚装彼嵩诘鞍仔蛄兄斜容^稀有，這樣可以基本實(shí)現(xiàn)把protein A定點(diǎn)定向偶聯(lián)到agarose beads上，使得agarose beads上的Protein A分子均處于有效的空間構(gòu)象，純化效率和親和力得到大大提升！
2、因其基質(zhì)的耐壓性（可耐受最高0.3 MPa的壓力），該產(chǎn)品可以用于工業(yè)大規(guī)模蛋白的純化，可在相對較高的流速下，實(shí)現(xiàn)對目的抗體的純化。
Protein A和Protein G對不同種屬和不同抗體亞型有不同的結(jié)合能力
需要根據(jù)這個(gè)表格來選擇適合目的抗體的純化填料
第二部分：技術(shù)原理
Protein A填料捕獲抗體分子的微觀示意圖
Protein A結(jié)合抗體分子CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域的交界部位
第三部分：技術(shù)流程
第四部分：結(jié)果展示
兔抗體血清經(jīng)過Protein A瓊脂糖填料純化后的SDS-PAGE檢測結(jié)果
Purification of rabbit IgG using Protein A resin 6FF.
High purity and high capacity of Protein A resin 6FF.
5 mL rabbit serum was loaded on the column containing 0.5 mL settled Protein A resin 6FF. Bound immunoglobulin species were eluted with elution buffer (Neutralization buffer was added before). Fractions were analyzed by SDS-PAGE.
Lanes: (1) Raw rabbit serum; (2) Flow-through; (3) Elution. Note that, heavy and light chains of IgG were mostly absent from the flow-through, indicating that most immunoglobulins were bound to the column.
第五部分：抗體純化試劑盒組分清單
（共計(jì)10個(gè)組分，均可單獨(dú)購買）
| 編號 | 組分名稱 | 數(shù)量 | 保存 | 注意事項(xiàng) |
| 下列組分收到后需儲存在 4 °C中。 |
| P2108 | Protein A agarose Resin 6FF for Antibody Purification（Protein A填料） | 5 mL | +4 °C | 含有2.5 mL settled resin, 填料可以重復(fù)使用10次以上 |
| ANTI-01 | 樣本稀釋Buffer for Antibody | 50 mL | +4 °C |
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| ANTI-02 | Binding / Equilibration Buffer for Antibody (BE緩沖液 for Antibody) | 100 mL | +4 °C |
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| ANTI-03 | Wash Buffer for Antibody | 250 mL | +4 °C |
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| ANTI-04 | IgG Elution Buffer for Antibody | 50 mL | +4 °C |
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| ANTI-05 | Neutralization Buffer | 2.5 mL | +4 °C |
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| 下列組分收到后需儲存在室溫中 |
| PURI-04 | 重力柱空柱 (12mL) 及控流閥 | 1個(gè) | 室溫 |
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| IF9217 | QuickStain? One-Step Protein Gel (PAGE) Blue Stain
蛋白PAGE膠快速染色液 | 50mL | 室溫 | 超快染色蛋白膠，靈敏度極高，10分鐘即可讓低至10ng的蛋白顯示條帶 |
| 下列組分收到后必須要儲存在 -20 °C中 |
| AT0097 | 山羊抗兔二抗HRP標(biāo)記 | 100 μL | -20 °C | 用于下游WB檢測 |
| AT1597 | Rabbit normal IgG抗體陽性對照 | 100 μL | -20 °C | 用于下游WB檢測 |
訂購及技術(shù)咨詢：朱小鷗，13817407320(微信同號)
關(guān)鍵字： Protein A;抗體純化填料;抗體純化試劑盒;兔抗體純化;
復(fù)名表觀遺傳學(xué)（上海復(fù)名醫(yī)療科技有限公司），專注于表觀遺傳學(xué)研究工具的開發(fā)和表觀技術(shù)服務(wù)的提供。
經(jīng)過多年和全球著名大學(xué)表觀研究領(lǐng)域?qū)＜医淌诘慕涣骱吞接?，積累經(jīng)驗(yàn)，精準(zhǔn)解決表觀研究工具領(lǐng)域的痛點(diǎn)難點(diǎn)，在表觀基因組學(xué)、表觀轉(zhuǎn)錄組學(xué)和表觀蛋白組學(xué)領(lǐng)域均開發(fā)了一系列研究試劑盒并提供表觀技術(shù)服務(wù)，和哈佛大學(xué)，華盛頓大學(xué)，斯坦福大學(xué)，麻省理工學(xué)院，UCSC，UCSF，HHMI，德國海德堡大學(xué)，法國國家健康與醫(yī)學(xué)研究院inserm等世界名校均建立了密切的合作和交流，所開發(fā)的抗體，試劑，試劑盒受到了全球客戶的歡迎。
Engibody為復(fù)名表觀遺傳學(xué)旗下品牌，所開發(fā)的抗體，試劑，表觀試劑盒在全球范圍內(nèi)銷售，受到眾多世界著名大學(xué)課題組老師及醫(yī)藥500強(qiáng)巨頭的認(rèn)可和喜愛。
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