品名：Smart-CoIP? CoIP Kit，貨號：IF9058，品牌：Engibody

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NIH、麻省理工、哈佛、斯坦福等世界名校課題組青睞并長期采購的RIP試劑盒！

Smart-CoIP? 試劑盒的五個巨大優(yōu)勢
1、本試劑盒適用于貼壁細胞、懸浮細胞、動物組織及植物組織，均有針對性的詳細步驟可以處理這些樣本類型，是個真正的多合一Kit。 

2、本試劑盒適用于胞漿蛋白互作PPI、膜蛋白互作PPI、核質(zhì)蛋白互作PPI及染色質(zhì)蛋白互作PPI的研究。 

3、本試劑盒還適用于Flag/GFP等標簽融合蛋白互作PPI及內(nèi)源蛋白互作PPI的研究。 

4、本試劑盒完美銜接四大CoIP下游實驗（Western Blotting、MS質(zhì)譜、酶活性測定及蛋白結(jié)構(gòu)解析）。 

5、本說明書是一本CoIP實驗的全面技術(shù)手冊，透徹分析了CoIP實驗中的重點、難點，對各種重點難點問題都有針對性的解決方案。同時包含了蛋白互作研究的基礎(chǔ)知識和經(jīng)典數(shù)據(jù)庫信息，有了這本保姆級使用手冊，所有疑難都會迎刃而解，CoIP盡在掌握之中。

第一部分：背景簡介及應(yīng)用場景
 
蛋白Co-IP實驗（免疫共沉淀，Co-Immunoprecipitation）是經(jīng)典的利用特異性抗體從樣品中捕獲靶蛋白（誘餌蛋白）及其互作蛋白（獵物蛋白）復(fù)合物的一項技術(shù)，能夠特異性富集所研究的互作蛋白PPI復(fù)合物。由于實驗過程中保持了蛋白的非變性狀態(tài)，保留了互作蛋白復(fù)合物的細胞內(nèi)天然構(gòu)象。相對于酵母雙雜交、GST Pull-down等方法，其顯著優(yōu)勢便是保存了互作蛋白復(fù)合物在目的組織/細胞內(nèi)的“體內(nèi)天然”狀態(tài)。
 
可以在下游銜接Western Blot、MS質(zhì)譜、酶活性測定及蛋白結(jié)構(gòu)解析等實驗。其中Western Blot用于驗證已知的互作蛋白，MS質(zhì)譜用于篩選發(fā)現(xiàn)未知的互作蛋白。
 
 1、CoIP和GST Pull-down，這兩種最經(jīng)典蛋白-蛋白互作技術(shù)的內(nèi)在關(guān)系是什么？
    CoIP———蛋白免疫共沉淀，In Vivo體內(nèi)研究蛋白互作PPI的經(jīng)典方法，保留在靶標細胞/組織內(nèi)的天然構(gòu)象蛋白互作的真實情況，可以用于驗證已知蛋白也可以用于篩選發(fā)現(xiàn)未知蛋白。

    GST Pull-down———GST 標簽融合蛋白與獵物蛋白pull-down，In Vitro體外研究蛋白互作PPI的經(jīng)典方法。將目的蛋白序列加上GST或His標簽序列進行基因合成并構(gòu)建重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化大腸桿菌后表達純化蛋白，再將GST 標簽融合蛋白固定于GSH磁珠上作為誘餌蛋白，然后去拉取與之結(jié)合的獵物蛋白。

注意：在下列兩種情況下GST Pull-down是不可替代和不可或缺的：
a. 誘餌蛋白找不到CoIP級的抗體，而GST Pull-down不需要CoIP級的免疫捕獲抗體，正好克服了這個難題。
b. 目的蛋白所在的研究對象（比如真菌等）無法采用普通的標簽質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)化的方法進行外源標簽融合蛋白的過表達，也找不到內(nèi)源蛋白的抗體，這時便無法實施CoIP實驗，因此GST Pull-down就是這類情況下研究蛋白互作的唯一選擇。

2、CoIP和Transient CoIP (PL鄰近標記技術(shù))、In Cell CoIP (FRET技術(shù))，這三種蛋白-蛋白互作技術(shù)之間的比較
 
a. Transient CoIP (PL鄰近標記技術(shù))主要優(yōu)勢是適用于瞬時作用的、脆弱的蛋白互作，通過對細胞內(nèi)的蛋白在原位進行生物素標記，使用鏈霉親和素beads捕獲標記后蛋白。這樣真正反映了In Vivo體內(nèi)蛋白互作，且具有空間蛋白互作組學的功能。
b. In Cell CoIP (FRET技術(shù))使用細胞內(nèi)實時熒光監(jiān)控技術(shù)，可以通過熒光顯微鏡實時觀察蛋白在Live Cell活細胞內(nèi)的實時互作動態(tài)。
c. 這兩種技術(shù)都有自己的獨特優(yōu)勢，是經(jīng)典CoIP技術(shù)的有益補充。 

第二部分：技術(shù)原理和技術(shù)流程
技術(shù)原理：
當細胞/組織在非變性條件下被裂解時，完整細胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質(zhì)X（誘餌蛋白）的抗體免疫沉淀X，那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y（獵物蛋白）也能被捕獲共同沉淀下來。
 
在細胞/組織裂解物中，特異性一抗結(jié)合誘餌蛋白，Protein A/G beads捕獲一抗-目的蛋白復(fù)合物，這個復(fù)合物也包含了互作蛋白（一個或者多個）。洗滌掉非特異性結(jié)合的蛋白后，再用洗脫液將互作蛋白復(fù)合物從Beads上洗脫下來，從而得到免疫共沉淀的產(chǎn)物，產(chǎn)物既可用Western Blot來檢測已知蛋白，也可用MS質(zhì)譜來鑒定未知蛋白。
 
技術(shù)流程：

根據(jù)研究的目的蛋白不同，采用2種不同的技術(shù)路線

1、對于內(nèi)源蛋白的CoIP，可以直接選購能捕獲目的蛋白的IP級抗體進行CoIP實驗。 

2、對于買不到合適抗體的內(nèi)源蛋白，可以轉(zhuǎn)染帶有Flag/GFP等標簽融合目的蛋白的質(zhì)粒，在靶細胞內(nèi)瞬時表達，然后采用Flag/GFP的IP級抗體來實施CoIP。




第五部分：試劑盒組分清單
 
（共計12個組分，均可單獨購買）
 
 

 
 
 
  Smart-CoIP? CoIP Kit 保姆級CoIP 試劑盒官網(wǎng)詳細頁面：
https://www.engibody.com/products/IF9058-Magnetic-Co-Immunoprecipitation-Co-IP-Kit.html 


注意：本試劑盒僅用于科學研究，不用于臨床診斷。

訂購及技術(shù)咨詢：朱小鷗，13817407320(微信同號)