特點&優(yōu)勢? 利用超靈敏的熒光探針DCFH-DA 進行活性氧ROS檢測
                 ? 提供了詳細的操作步驟
                 ? 適合流式細胞儀和熒光顯微鏡檢測活性氧水平

試劑盒組分? DCFH-DA (10 mM)
                 ?PositiveControl(50mM)

使用中注意事項? 不同批次號、不同廠家之間的組分不要混用；否則，可能導(dǎo)致結(jié)果異常。
? 混合或復(fù)溶組分時，避免產(chǎn)生氣泡。
? 勤換吸頭，避免各組分之間的交叉污染。
? 實驗開始前，確保所有的組分及設(shè)備處于合適的溫度。
? 陽性對照H2O2一般使用濃度為100 μM （推薦濃度50-200 μM，具體依細胞類型而定） 。通常刺激后30 min-4 h可以觀察到顯著的活性氧水平升高。對于不同的細胞，活性氧陽性對照的效果可能有較大的差別。如果在刺激后30 min內(nèi)觀察不到活性氧的升高，可延長誘導(dǎo)時間或適當(dāng)提高活性氧陽性對照的濃度。如果熒光信號過強，可縮短誘導(dǎo)時間或適當(dāng)降低活性氧陽性對照的濃度。
? 實驗過程中，如果陰性對照細胞熒光也比較強，可以按照1:2000-1:5000 稀釋熒光探針DCFH-DA，使DCFH-DA的終濃度為 2-5 μM。探針裝載的時間可在15-60 min 內(nèi)適當(dāng)進行調(diào)整，盡量縮短讀片時的曝光時間，并且試驗組、對照組曝光時間需保持一致。
? 活性氧陽性對照 (H2O2) 僅僅用于作為陽性對照的樣品，并非所有試驗組樣品中都需加入活性氧陽性對照。
? 探針裝載后，一定要洗凈未進入細胞內(nèi)的探針，否則會導(dǎo)致背景較高。
? 盡量縮短探針裝載后到檢測所用的時間（刺激時間除外），以減少各種可能的誤差。