Arenobufagin 是一種來自蟾蜍毒液的天然蟾二烯內酯，通過抑制 PI3K/Akt/mTOR 通路誘導人肝細胞癌細胞凋亡和自噬。

肝細胞癌 （HCC） 是一種致命的癌癥，迄今為止沒有有效的化療。目前，只有索拉非尼（一種多靶點酪氨酸激酶抑制劑）略微提高了 HCC 患者的生存率。
方法和結果：
在中醫(yī)中經常用于治療肝癌的蟾蜍毒液中尋找天然抗 HCC 成分時，我們發(fā)現 Arenobufagin 是一種來自蟾蜍毒液的蟾蜍內酯，對 HCC HepG2 細胞以及相應的多重耐藥 HepG2/ADM 細胞具有有效的抗腫瘤活性。我們發(fā)現 Arenobufagin 誘導 HCC 細胞線粒體介導的細胞凋亡，線粒體電位降低，Bax/Bcl-2 表達比增加，Bax 從胞質溶膠易位到線粒體。Arenobufagin 還誘導 HepG2/ADM 細胞自噬。自噬特異性抑制劑（3-甲基腺嘌呤、氯喹和巴弗洛霉素 A1）或 Beclin1 和 Atg 5 小干擾 RNA （siRNA） 增強了 Arenobufagin 誘導的細胞凋亡，表明 Arenobufagin 介導的自噬可以保護 HepG2/ADM 細胞免于凋亡細胞死亡。此外，我們觀察到 Arenobufagin 對磷脂酰肌醇 3-激酶 （PI3K） /Akt/哺乳動物雷帕霉素靶標 （mTOR） 通路的抑制作用。有趣的是，雷帕霉素或 siRNA 雙鏈體對 mTOR 的抑制增強了 Arenobufagin 誘導的細胞凋亡和自噬。最后，Arenobufagin 抑制 HepG2/ADM 異種移植腫瘤的生長，這與聚 （ADP-核糖） 聚合酶切割、輕鏈 3-II 激活和 mTOR 抑制有關。
結論：
總之，我們首先在體外和體內證明了 Arenobufagin 對 HCC 細胞的抗腫瘤作用。我們闡明了 Arenobufagin 的潛在抗腫瘤機制，這些機制涉及通過抑制 PI3K/Akt/mTOR 通路實現細胞凋亡和自噬之間的串擾。本研究可能為未來使用 Arenobufagin 作為 HCC 化療藥物的臨床應用提供理論依據。

超快液相色譜-串聯質譜法定量測定大鼠血漿中 arenobufagin 及其在藥代動力學研究中的應用。

建立了一種快速、靈敏、選擇性的超快液相色譜-串聯質譜定量測定大鼠血漿中 Arenobufagin 的方法。
方法和結果：
樣品預處理包括使用 0.1 mL 大鼠血漿用甲醇進行一步蛋白沉淀。分離在 Shim-pack XR-ODS II（75 mm×2.0 mm，內徑 2.1 μm）色譜柱上進行，梯度洗脫流速為 0.30 mLmin（-1）。流動相為乙腈和0.1%甲酸的水溶液。使用柱后切換閥以減少基質效應。電噴霧電離后，在三重四聯串聯質譜儀上以多反應監(jiān)測模式進行檢測。在 1.056-1056 ngmL（-1） 的濃度范圍內獲得 Arenobufagin 的線性校準曲線，定量下限為 1.056ngmL（-1）。在所有質量控制水平下，日內和日間精密度值均低于 15%，準確度范圍為 5.4% 至 9.8%。
結論：
該方法成功應用于大鼠腹腔給藥后血漿中 Arenobufagin 的測定和藥代動力學研究。

arenobufagin 在體外和體內的抗血管生成作用

本研究旨在探討 Arenobufagin 在體外和體內的抗血管生成作用。
方法和結果：
通過 MTT 法測定 Arenobufagin 對 CNE-2 、 Hep2 、 SH-SY5Y 、 LOVO 、 PC-3 和 DU145 細胞以及人臍靜脈內皮細胞 （HUVECs） 的抗增殖作用。通過顯微鏡觀察 Arenobufagin 處理后 LOVO 和 HUVECs 的細胞形態(tài)變化。Arenobufagin 以劑量依賴性方式抑制 CNE-2 、 Hep2 、 SH-SY5Y 、 LOVO 、 PC-3 、 DU145 和 HUVECs 的增殖。此外，明顯觀察到人癌細胞中 Arenobufagin 的亞細胞毒性濃度誘導 HUVECs 活力的顯著降低。采用雞胚絨毛膜尿囊膜 （CAM） 模型檢測 Arenobufagin 體內抗血管生成作用。Arenobufagin 顯著抑制 CAM 的血管生成。細胞周期分析顯示，G2/M 期停滯，隨著 Arenobufagin 濃度的增加，出現 sub-G1 峰。PI/Annexin V 雙染色測定進一步證明 Arenobufagin 可以以劑量和時間依賴性方式誘導細胞凋亡。Arenobufagin 處理后，流式細胞術分析檢測到的線粒體電位塌陷增加。它還觀察到 PARP 被 Western blotting 裂解為 p85 活性形式。
結論：
綜上所述，Arenobufagin 在體外和體內均具有顯著的抗血管生成作用，其抗血管生成的作用機制可能與細胞周期停滯和靜脈內皮細胞凋亡有關。