本品產(chǎn)僅供科研
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產(chǎn)品名稱:狐貍源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:50次/盒
本產(chǎn)品就是根據(jù)PCR原理專門開發(fā)的試劑盒,它具有下列特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
3. 產(chǎn)品精心優(yōu)化且特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計,不會跟除此之外的其它微生物DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
4. PCR mix中含上樣染料,PCR后可以直接上樣電泳。
5. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的PCR反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于定性實驗,不能用于定量。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研
狐貍源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒操作方法
一、制備標準曲線樣品(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。
1.標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
2.用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液,最好用帶芯槍頭,下同)。
3.在7號管中加入5 μL 陽性對照(其濃度為1×10E8拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
4.換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
5.換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
6.重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
1.用自選方法純化樣品的DNA,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
2.如果有N個樣品,則需要進行N+2個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20μL體系,在樣品制備室進行)
如果進行定量分析,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于標準曲線樣品。
如果做定性分析,則6個標準曲線樣品只選一個做(可以選4號,其余樣品不變)。以下只介紹定量分析的反應(yīng)設(shè)置。
狐貍源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、運輸及保存:低溫運輸,-20℃保存,保存期限一年。陽性對照需單獨放置,不要污染其他試劑。
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
4、自備試劑:樣品DNA。
狐貍源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒注意事項
1 所有操作嚴格按照說明書進行;
2試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,混勻并短暫離心;
3 反應(yīng)液應(yīng)避光保存;
4反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;
5使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服;
6 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行,以免交叉污染;
7 實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;
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