細胞名稱:SNU-1330/LUC(帶熒光素酶)
細胞代次:P4
細胞規(guī)格:T25瓶(包郵)/2冷凍管(需加干冰運輸費)
細胞凍存:無血清凍存液
細胞傳代:第一次建議1:2
SNU-1330/LUC(帶熒光素酶),培養(yǎng)方法
培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶,消毒后放到超凈臺內嚴格無菌操作,將細胞瓶放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)后再做處理。顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存(最好40x,100x,200x各一張),前三天照片是重要售后依據(jù),不提供照片默認收到狀態(tài)良好。(換液后將瓶蓋擰松)
1、收到細胞后,請按照以下方法進行操作:
取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài),然后換用新鮮完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。
2、細胞傳代:
1)細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞一次;
2)添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;
3)棄上清,沉淀細胞用12ml完全培養(yǎng)基重懸,然后按1:2比例進行分瓶傳代,最后放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4)待細胞完全貼壁后,觀察培養(yǎng)結果,之后進行換液培養(yǎng)或傳代。
3、細胞凍存:
1)細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞一次;
2)添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;
3)用適量的凍存液(FBS:DMSO=9 :1)重懸細胞,并放置于凍存管中;
4)先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃過夜,24h后轉入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。
4、細胞復蘇:
1)從液氮中取出細胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具),快速將其置入37℃水浴中解凍,直至凍存管中無結晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁;
2)將凍存管中的細胞移至含5ml完全培養(yǎng)基的15ml離心管中, 1000rpm離心5min;
3)棄上清,沉淀用5ml完全培養(yǎng)基重懸,接種25cm2培養(yǎng)瓶,于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4)第二天,換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
注意事項:有些細胞貼壁不牢,在運輸過程中容易發(fā)生細胞脫落,這是正常現(xiàn)象。如脫離較多可將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管,1000rpm離心5min,收集上清作過渡培養(yǎng)(后期對比培養(yǎng)),沉淀加入胰酶1-2ml,輕輕吹打,重懸,消化1-2分鐘后,加5ml完全培養(yǎng)基終止反應。再離心,棄上清,加1-2ml完全培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代(兩個T25),補充新的完全培養(yǎng)基至5-8ml/瓶,最后放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
SNU-1330/LUC(帶熒光素酶),售后服務
1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題,細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等,重發(fā);
2. 細胞污染問題,請在收到產(chǎn)品48小時內,給我們提出真實的實驗結果,核實后重發(fā);
3. 常溫發(fā)貨的細胞靜置24小時后,干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后,絕大多數(shù)細胞未存活,(需提供真實清晰的細胞狀態(tài)照片),重發(fā);
4. 干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細胞靜置4小時候并且未開封,出現(xiàn)污染,重發(fā);
5. 細胞活性問題,請在收到產(chǎn)品7天內給我們提出真實的實驗結果,用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,核實后予重發(fā);
6. 細胞收到當天以及第2,3天請拍照,3天未告知的,視為產(chǎn)品合格。4-7天內出現(xiàn)問題有提供收到細胞前3天照片和細胞出現(xiàn)問題時照片以及細胞相關操作的詳細步驟的,并跟技術人員溝通的,由技術人員判定為我方責任的,重發(fā)。技術人員判定為雙方承擔責任的由雙方進行協(xié)商處理或者按合同價的50%收費重發(fā)。
2)細胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些?
1. 客戶造成細胞污染,不重發(fā);
2. 客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
3. 非本庫推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
4. 細胞狀態(tài)不好,未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā);
5. 細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,不重發(fā);
6. 細胞收到2天內,未告知,不重發(fā);
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