作為對類黃酮生物合成關(guān)鍵酶的作用和位置研究的一部分,禾本科葉組織中的查爾酮合酶 (CHS) 被純化并進(jìn)行了生化和免疫學(xué)表征。方法和結(jié)果:底物p-香豆酰輔酶A和咖啡酰輔酶A的Km值分別為0.6和1.45 μM,丙二酰輔酶A的Km值分別為1.4和1.5 μM。形成2′,4,4′,6′-四羥基查耳酮的最適pH值為8,形成2′,3,4′,6′-五羥基查耳酮的最適pH值為6.5。9 μM 芹菜素、13 μM 木犀草素、36 μM 輔酶 A、45 μM 柚皮素、45 μM 荊荊素 2''-O-阿拉伯糖苷引起酶活性降低 50%。純化酶的SDS-PAGE分析揭示了兩種肽,表觀分子量分別為43和44 kd。結(jié)論:在使用純化酶和粗酶提取物運(yùn)行的蛋白質(zhì)印跡中,兩種肽均通過針對黑麥或歐芹CHS的多克隆抗體進(jìn)行免疫染色。單克隆抗體對這些肽的識別表明,兩種肽相似且來源于CHS。 應(yīng)用于使用含有CHS的歐芹、菠菜、豌豆、玉米和燕麥提取物進(jìn)行的蛋白質(zhì)印跡,相同的抗體僅標(biāo)記單個肽,或者在某些情況下甚至可能標(biāo)記兩個以上的肽。
已從黑麥的初級葉中分離出兩種異牡荊素 2“-O-糖苷,鑒定為異牡荊素 2''-O-阿拉伯糖苷和異牡荊素 2。
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王玲