本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診
產(chǎn)品名稱:小鼠β-聯(lián)蛋白(β-Catenin)ELISA試劑盒
收集、處理及保存方法應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本水平。用純化抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入抗體,再與HRP標(biāo)記的抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò) 洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品濃度。
小鼠β-聯(lián)蛋白(β-Catenin)ELISA試劑盒組成
小鼠β-聯(lián)蛋白(β-Catenin)ELISA試劑盒操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白孔調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
小鼠β-聯(lián)蛋白(β-Catenin)ELISA試劑盒注意事項(xiàng)
1、每個(gè)樣本量收集體積=100ulx檢測(cè)種類,如果要做復(fù)孔,標(biāo)本量收集體積=100ulx檢測(cè)種類x2
2、樣本收集后若在一周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)可保存于2-8°C,若不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)進(jìn)行分裝,凍存于-20°或-80°C,避免反復(fù)凍融
3、試劑盒的檢測(cè)范圍不等同于樣本中待測(cè)物的濃度范圍,建議實(shí)驗(yàn)前通過(guò)相關(guān)文獻(xiàn)預(yù)估樣本中待測(cè)物的濃度并通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定樣本。
4、血清標(biāo)本采集是應(yīng)注意避免溶血,紅細(xì)胞溶解是會(huì)釋放出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì),溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色
5、為了保證尿液檢測(cè)的準(zhǔn)確性,必須正確收集尿液標(biāo)本和保存,收集尿液的容器必須要清潔干燥, 使用一次性的容器,避免因用藥并清潔不到而造成的污染,尿液樣本必須新鮮,留取后,應(yīng)及時(shí)檢測(cè)或保存
6、標(biāo)本宜在新鮮是檢測(cè)如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)。如在冰箱中保存過(guò)久,其中可能發(fā)生聚合,間接法ELISA中樂(lè)視本底加深,
7、反復(fù)凍融會(huì)使蛋白效價(jià)降低,所以待測(cè)樣本如需多次檢測(cè),宜少量分裝凍存
計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。
1.試劑盒保存條件2-8℃。
2. 有效期:6個(gè)月。
關(guān)鍵字: 小鼠β-聯(lián)蛋白(β-Catenin)EL;小鼠β-聯(lián)蛋白(β-Catenin)EL;小鼠β-聯(lián)蛋白(β-Catenin)EL;雅吉檢測(cè)試劑盒;ELISA試劑盒;
上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月,是一家面向生命科學(xué)領(lǐng)域,提供科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)的生物企業(yè)。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)等 。旗下?lián)碛?“雅吉生物”、“晶風(fēng)生物”、“彩佑實(shí)業(yè)”、“GTX” 品牌。通過(guò)公司各部門(mén)員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度,深得新老客戶厚愛(ài),本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽(yù)”的精神,堅(jiān)持以優(yōu)良的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽(yù)為國(guó)內(nèi)外廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。
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