產(chǎn)品名稱:人腦微血管內皮細胞hCMEC/D3
傳代方法 | 次建議1:2傳代 | 凍存條件 | 無血清凍存液（貨號：C7001） |
細胞描述 | 本庫的細胞僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫細胞轉讓給第三者。 |
培養(yǎng)備注 | 用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過渡培養(yǎng) |
人腦微血管內皮細胞hCMEC/D3收到貨后處理
細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)霓k法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內，嚴格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基）
人腦微血管內皮細胞hCMEC/D3培養(yǎng)步驟
一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。
三、細胞凍存：（注：無血清凍存液凍存細胞的方法請參考我司官網(wǎng)貨號：C7001）
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、用適量的凍存液重懸細胞，并放置于凍存管中；
4、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃
人腦微血管內皮細胞hCMEC/D3部分產(chǎn)品：
YS3561 cjm CJM
YS3562 clonem3s91 CloneM-3(S91)
YS3563 cls54 CLS-54
YS3564 cmk115 CMK-11-5
YS3565 cmk86 CMK-86
YS3566 cocm1 CoCM-1
YS3567 colo206f COLO206F
YS3568 colo320dmf COLO320DMF
YS3569 colo668 COLO668
YS3570 colo679 COLO679
YS3571 colo684 COLO684
YS3572 colo741 COLO741
YS3573 colo792 COLO792
YS3574 colo60h COLO-60H
YS3575 colo94h COLO-94H
YS3576 corl105 COR-L105
YS3577 corl23cpr COR-L23/CPR
YS3578 corl23r COR-L23/R
YS3579 corl47 COR-L47
YS3580 corl88 COR-L88
YS3581 corl95 COR-L95
YS3582 cov504 COV504
YS3583 cov644 COV644
YS3584 ctb1 CTB-1
YS3585 delta47 Delta-47
YS3586 dms273 DMS273
YS3587 dms454 DMS454
YS3588 dv90 DV-90
YS3589 eb1 EB1
YS3590 eb2 EB2
YS3591 ecgi10 EC-GI-10
YS3592 f36p F-36P
YS3593 f4nmel F4N(MEL)
YS3594 f98egfr F98EGFR
YS3595 f98npegfrviii F98npEGFRvIII
YS3596 fak FAK++
YS3597 fao Fao
YS3598 fm3a FM3A
YS3599 /Furpnt2 /Fu-RPNT-2
YS3600 g292clonea141b1 G-292cloneA141B1
YS3601 ga10 GA-10
YS3602 gak GAK
YS3603 gb1 GB-1
YS3604 gi1 GI-1
YS3605 gm04281c GM04281C
YS3606 gm09197c GM09197C
YS3607 gm12580 GM12580
YS3608 gm12611 GM12611
YS3609 gm15850 GM15850
YS3610 gm2005 GM2005
YS3611 gm20942 GM20942
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