簡(jiǎn)介
瓊脂糖由D-半乳糖和3,6-內(nèi)醚-L-半乳糖構(gòu)成的鏈狀中性多糖,結(jié)構(gòu)單元中含有羥基官能團(tuán),易于與結(jié)構(gòu)單元中的氫原子和鏈段周圍水分子形成氫鍵。
主要性質(zhì)
在低溫時(shí),瓊脂糖糖鏈依靠氫鍵作用,以雙螺旋方式相互纏繞,形成雙螺旋結(jié)構(gòu),緊密排列,形成凝膠,呈白色渾濁;在高溫時(shí),結(jié)構(gòu)單元中的氫鍵被破壞,以無(wú)規(guī)線團(tuán)分散在水中,溶液澄清透明,是一種具有特殊溫度響應(yīng)性的聚合物。
瓊脂糖凝膠性能瓊脂糖在水中一般加熱到90℃以上溶解,溫度下降到35-40℃時(shí)形成良好的半固體狀的凝膠,這是它具有多種用途的主要特征和基礎(chǔ)。瓊脂糖凝膠性能通常用凝膠強(qiáng)度表Chemicalbook示。強(qiáng)度越高,凝膠性能越好。質(zhì)量較好的瓊脂糖強(qiáng)度通常在1200克/cm2以上(1%膠濃度)。瓊脂糖的凝膠性是由存在的氫鍵所致,凡是能破壞氫鍵的因素都能導(dǎo)致凝膠性的破壞。
電泳優(yōu)勢(shì)
1.瓊脂糖凝膠電泳操作簡(jiǎn)單,電泳速度快,樣品不需事先處理就可以進(jìn)行電泳。
2.瓊脂糖凝膠結(jié)構(gòu)均勻,含水量大(約占98%~99%),近似自由電泳,樣品擴(kuò)散較自由電流,對(duì)樣品吸附極Chemicalbook微,因此電泳圖譜清晰,分辨率高,重復(fù)性好。
3.瓊脂糖透明無(wú)紫外吸收,電泳過(guò)程和結(jié)果可直接用紫外光燈檢測(cè)及定量測(cè)定。
4.電泳后區(qū)帶易染色,樣品極易洗脫,便于定量測(cè)定。制成干膜可長(zhǎng)期保存。
制備
一種低凝固溫度瓊脂糖的制備方法,包括如下步驟:
(1)將4.0g瓊脂糖粉末于90℃下溶于150mL去離子水中,配制成瓊脂糖溶液;
(2)上述瓊脂糖溶液自然冷卻至82℃后,向其中加入0.9mL硼氫化鈉的氫氧化鈉溶液進(jìn)行還原反應(yīng)15min,反應(yīng)過(guò)程中觀察溶液的顏色變化,當(dāng)顏色由淺綠色變?yōu)闊o(wú)色透明液體時(shí),終止還原反應(yīng),硼氫化鈉的氫氧化鈉溶液中,硼氫化鈉的濃度為4.4mol/L,溶劑為10.0~20.0mol/LNaOH溶液;
(3)向步驟(2)所得溶液中加入40mL濃度為3.8mol/L的氫氧化鈉溶液進(jìn)行堿化處理;
(4)將步驟(3)的溶液迅速冷卻至5℃,邊攪拌邊于60min內(nèi)緩慢滴加20~60%(v/v)環(huán)氧Chemicalbook乙烷水溶液至環(huán)氧乙烷在溶液中的濃度為1.0~5.0wt%,再攪拌反應(yīng)60min;
(5)將步驟(4)所得的溶液加熱至70℃,邊攪拌邊滴加3.0mol/L的乙酸溶液調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.2;
(6)邊攪拌邊將45℃的熱異丙醇加入到步驟(5)的溶液中,然后靜置1.0~3.0h進(jìn)行醇沉分級(jí);
(7)將步驟(6)所得的物料經(jīng)離心過(guò)濾,得到白色沉淀物,用60%體積濃度的異丙醇浸沒(méi)后進(jìn)行粉碎,再以異丙醇洗滌4次,壓榨脫水得濾餅;
(8)將上述濾餅置于55℃的空氣干燥箱中恒溫干燥12.0h后,再粉碎、200目篩網(wǎng)過(guò)篩,即得所述低凝固溫度的瓊脂糖,該瓊脂糖的熔化溫度為60.0℃,凝固溫度26.5℃,凝膠強(qiáng)度為265g/cm2。
用途 瓊脂糖可用于脫氧核糖核酸(DNA),脂蛋白和免疫電泳用。生化研究免疫擴(kuò)散等的底物。生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)和微生物學(xué)研究。
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