產(chǎn)品名稱：人胚胎滋養(yǎng)細胞HTR8Svneo
傳代方法 | 次建議1:2傳代 | 凍存條件 | 無血清凍存液（貨號：C7001） |
細胞描述 | 本庫的細胞僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫細胞轉(zhuǎn)讓給第三者。 |
培養(yǎng)備注 | 用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過渡培養(yǎng) |
人胚胎滋養(yǎng)細胞HTR8Svneo貨后處理
細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)霓k法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基）
人胚胎滋養(yǎng)細胞HTR8Svneo培養(yǎng)步驟
一、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作；將小管細胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。
三、細胞凍存：（注：無血清凍存液凍存細胞的方法請參考我司官網(wǎng)貨號：C7001）
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、用適量的凍存液重懸細胞，并放置于凍存管中；
4、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃
人胚胎滋養(yǎng)細胞HTR8Svneo相關(guān)細胞如下：
YS2124 CA2F1 小鼠雜交瘤細胞CA2F1
YS2125 CA1A9 小鼠雜交瘤細胞CA1A9
YS2126 CA6B10 小鼠雜交瘤細胞CA6B10
YS2127 TGHAVSMC 人主動脈平滑肌細胞TGHAVSMC
YS2128 KYSE450 人食管鱗癌細胞KYSE450
YS2129 HTR8Svneo 人胚胎滋養(yǎng)細胞HTR8Svneo
YS2130 MA10 小鼠睪丸上皮樣細胞MA10
YS2131 NE4C 小鼠腦神經(jīng)干細胞NE4C
YS2132 L2 大鼠肺上皮細胞L2
YS2133 A72 犬腫瘤成纖維細胞A72
YS2134 HIEC6 人小腸上皮細胞HIEC6
YS2135 FHs74Int 人小腸上皮細胞FHs74Int
YS2136 HEK293F 人胚腎細胞-F克隆HEK293F
YS2137 HEK293EBNA 穩(wěn)定表達EBNA1的人胚腎細胞HEK293EBNA
YS2138 3T3Swissalbino 小鼠胚胎成纖維細胞3T3Swissalbino
YS2139 ZR7530 人乳腺導(dǎo)管癌細胞ZR7530
YS2140 LL2(LLC1) 小鼠肺癌細胞LL2(LLC1)
YS2141 EPC 鯉魚上皮細胞/胖頭鰷魚上皮細胞EPC
YS2142 BABLC1 BABL/C1小鼠14天胚胎成纖維細胞BABLC1
YS2143 EBVHuman EBV-轉(zhuǎn)化人淋巴細胞EBV
YS2144 KM9304 EBV-轉(zhuǎn)化人淋巴細胞（彝族）KM9304
YS2145 MLA144 MLA144長臂猿淋巴瘤細胞MLA144
YS2146 WGHL1 白化金黃地鼠肺成纖維細胞WGHL1
YS2147 ZF4 斑馬魚細胞ZF4
YS2148 CP88 草魚胚胎細胞CP88
YS2149 ZC79001 草魚吻皮細胞ZC79001
YS2150 RL1 大鼠肺成纖維細胞RL1
YS2151 REM 大鼠胚肌細胞REM
YS2152 RES 大鼠胚皮膚成纖維細胞RES
YS2153 PtK1 袋鼠腎細胞PtK1
YS2154 PtK2 袋鼠腎細胞PtK2
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