產(chǎn)品名稱：牙鲆細胞FG
傳代方法 | 次建議1:2傳代 | 凍存條件 | 無血清凍存液（貨號：C7001） |
細胞描述 | 本庫的細胞僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫細胞轉讓給第三者。 |
培養(yǎng)備注 | 用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過渡培養(yǎng) |
牙鲆細胞FG貨后處理
細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)霓k法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基）
牙鲆細胞FG培養(yǎng)步驟
一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi)，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。
三、細胞凍存：（注：無血清凍存液凍存細胞的方法請參考我司官網(wǎng)貨號：C7001）
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、用適量的凍存液重懸細胞，并放置于凍存管中；
4、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃
牙鲆細胞FG部分相關細胞如下：
YS2025 STO 小鼠胚胎成纖維細胞STO
YS2026 P3X63Ag8653 小鼠骨髓瘤細胞P3X63Ag8.653
YS2028 B6YH4 小鼠雜交瘤細胞B6YH4
YS2029 Sf21 昆蟲卵巢細胞Sf21
YS2030 B82 小鼠腫瘤細胞-L929衍生的亞型B82
YS2031 IBRS2 豬腎傳代細胞IBRS2
YS2032 MA7825s8101 小鼠乳腺癌細胞MA7825s8101
YS2033 FRhk4 羅猴胎腎上皮細胞FRhk4
YS2034 HIC 人結直癌細胞HIC
YS2035 1590 人乳腺癌細胞1590
YS2036 Anglne 人卵巢癌細胞Anglne
YS2037 COC1/ddp 人卵巢癌細胞COC1細胞耐藥亞株COC1/ddp
YS2038 LLCWRC256 大鼠腹水癌細胞LLCWRC256
YS2039 SVP Vero細胞衍生株SVP
YS2040 Hs746THs746THs746T 人胃腺癌細胞Hs746THs746THs746T
YS2041 Hep3B217Hep3B217Hep3B217 人肝癌細胞Hep3B2.17Hep3B2.17Hep3B2.17
YS2042 BeWo 人胎盤絨膜癌細胞BeWo
YS2043 143BTK 人胸腺激酶缺陷細胞143BTK
YS2044 GIC 草魚腎細胞GIC
YS2045 HL 人胚肺二倍體細胞HL
YS2046 L8824 草魚肝臟細胞L8824
YS2047 CIK 草魚腎臟細胞CIK
YS2048 WEHI164 小鼠纖維肉瘤細胞WEHI164
YS2049 U251MGU251MG 人神經(jīng)膠質細胞瘤細胞U251MGU251MG
YS2050 Jurkat,CloneE61 人急性T淋巴細胞白血病細胞Jurkat,CloneE61
YS2051 NRK 大鼠正常腎細胞NRK
YS2052 CA46 人Burkitts淋巴瘤細胞CA46
YS2053 RK13 兔腎細胞RK13
YS2054 H4ⅡE 大鼠肝癌細胞H4ⅡE
YS2055 IMR32 人神經(jīng)母細胞瘤細胞IMR32
YS2056 SW626 人卵巢腺癌細胞SW626
YS2057 104C1 豚鼠胚胎細胞104C1
YS2058 NIH:OVCAR3 人卵巢腺癌細胞NIH:OVCAR3
YS2059 WI38VA13subline2RA 人胚肺細胞VA13細胞WI38VA13subline2RA
YS2060 W632 小鼠B細胞雜交瘤細胞W632
YS2061 C636 幼蚊細胞C636
YS2062 PA317 小鼠胚胎成纖維細胞PA317
YS2063 H4 人腦神經(jīng)膠質瘤細胞H4
YS2064 MADB106 大鼠乳腺癌細胞MADB106
YS2065 S180S2D9 小鼠腹水瘤細胞S180S2D9
YS2066 H22H8D8 小鼠肝癌細胞H22H8D8
YS2067 EACE2G8 小鼠腹水瘤細胞EACE2G8
YS2068 S2 果蠅細胞S2
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