產(chǎn)品名稱：大鼠肝癌細胞H4IIEC3
傳代方法 | 次建議1:2傳代 | 凍存條件 | 無血清凍存液（貨號：C7001） |
細胞描述 | 本庫的細胞僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫細胞轉(zhuǎn)讓給第三者。 |
培養(yǎng)備注 | 用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過渡培養(yǎng) |
大鼠肝癌細胞H4IIEC3到貨后處理
細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)霓k法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基）
大鼠肝癌細胞H4IIEC3培養(yǎng)步驟
一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi)，嚴格無菌操作；將小管細胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。
三、細胞凍存：（注：無血清凍存液凍存細胞的方法請參考我司官網(wǎng)貨號：C7001）
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、用適量的凍存液重懸細胞，并放置于凍存管中；
4、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃
大鼠肝癌細胞H4IIEC3部分相關細胞如下：
YS1904 LB31ATCCHB298 小鼠雜交瘤細胞LB3.1ATCCHB298
YS1905 MOVAS1 小鼠主動脈血管平滑肌細胞MOVAS1
YS1906 TC1crl2493 小鼠淋巴母細胞b淋巴細胞TC1crl2493
YS1907 RAW2647SEAP/LUC 小鼠白血病細胞RAW264.7SEAP/LUC
YS1908 NSC34 小鼠神經(jīng)元細胞NSC34
YS1909 CTLA4Ig24 中國倉鼠卵巢細胞CTLA4Ig24
YS1910 Lec1 倉鼠卵巢細胞Lec1
YS1911 OK 負鼠腎上皮細胞OK
YS1912 AB22 小鼠胚胎干細胞AB2.2
YS1913 2666 小鼠胰腺腺泡癌細胞2666
YS1914 C1498 小鼠急性骨髓性白血病C1498
YS1915 B16F10OVA(OPT) 小鼠黑色素瘤細胞熒光素酶標記-OVA雞基因修飾B16F10OVA(OPT)
YS1916 SCC7 小鼠頭頸鱗癌細胞SCC7
YS1917 GT11 小鼠垂體瘤細胞GT11
YS1918 GT17 小鼠垂體瘤細胞GT17
YS1919 DC24 小鼠樹突狀細胞DC2.4
YS1920 MN9D 小鼠中腦多巴胺能神經(jīng)元細胞MN9D
YS1921 CHOK1 倉鼠卵巢細胞CHOK1
YS1922 HEIOC1 小鼠耳蝸毛細胞HEIOC1
YS1923 CTLL2 小鼠T淋巴細胞CTLL2
YS1924 E0771 小鼠髓樣乳腺癌細胞E0771
YS1925 moc1 小鼠口腔鱗狀細胞moc1
YS1926 moc2 小鼠口腔鱗狀細胞moc2
YS1927 min6 小鼠胰島β細胞min6
YS1928 LA795 小鼠肺癌細胞-腺癌LA795
YS1929 hep534 小鼠肝癌細胞hep53.4
YS1930 CMT6461 小鼠肺腺癌細胞CMT6461
YS1931 MELorMEL745AclDS19 小鼠紅白血病細胞MELorMEL745Acl.DS19
YS1932 JAWS2 小鼠骨髓未成熟樹突狀細胞JAWS2
YS1933 MCA205 小鼠纖維肉瘤細胞MCA205
YS1934 NIH3T3/RFP 小鼠胚胎細胞NIH3T3/RFP
YS1935 YUMM17 小鼠黑色素瘤細胞YUMM1.7
YS1936 MC38OVA 小鼠結(jié)腸癌細胞-OVA雞基因修飾MC38OVA
YS1937 15P1 小鼠睪丸上皮細胞15P1
YS1938 AtT20 小鼠垂體瘤細胞AtT20
YS1939 cmt93 小鼠結(jié)直腸癌細胞cmt93
YS1940 L6565 小鼠白血病細胞L6565
YS1941 Y1[Y1] 小鼠腎上腺皮質(zhì)瘤細胞Y1[Y1]
YS1942 CFSC8B 大鼠永生型肝星狀細胞CFSC8B
YS1943 AR42J 大鼠胰腺外分泌腺腫瘤細胞AR42J
YS1944 INS1 大鼠胰島細胞瘤細胞INS1
YS1945 RSC96 大鼠雪旺細胞RSC96
YS1946 A7r5 大鼠胸大動脈平滑肌細胞A7r5
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