中文名：Pyrophosphatase, Inorganic （yeast）
英文名：Pyrophosphatase, Inorganic （yeast）
純度：醫(yī)藥級，≥95%，0.1U/μl
貨號：P489053
包裝：100u
存儲溫度：-20°C儲存
產(chǎn)品介紹：
產(chǎn)品描述
大體系體外轉(zhuǎn)錄mRNA 過程中，不可避免的會產(chǎn)生無機焦磷酸鹽，這些物質(zhì)對轉(zhuǎn)錄造成了極大的抑制作用，無機焦磷酸酶（ PPase ）可以水解核酸擴增實驗中產(chǎn)生的無機焦磷酸鹽，促進反應(yīng)平衡向產(chǎn)物生成端平移，增加產(chǎn)物的量。
PPase（Pyrophosphatase, Inorganic，無機焦磷酸酶）的分子量約為 63kD，可催化無機焦磷酸鹽水解生成正磷酸鹽：P2O74_+H2O+PPase→2HPO42_。在核酸擴增實驗中，PPase 可水解隨著反應(yīng)生成的無機焦磷酸鹽，避免其對反應(yīng)體系的抑制。焦磷酸鹽的去除可使反應(yīng)平衡向產(chǎn)物生成端平移。?
本制品為利用大腸桿菌大規(guī)模發(fā)酵表達的 GMP 級重組無機焦磷酸酶（酵母來源），采用藥用規(guī)格原輔料生產(chǎn)，并嚴格控制宿主蛋白質(zhì)殘留、核酸殘留等，符合 GMP 規(guī)范的產(chǎn)品生產(chǎn)與質(zhì)量管理規(guī)程保障生產(chǎn)過程及所有原輔料可追溯。?
質(zhì)量要求
| 項目 |
標準 |
| 外觀 |
澄明液體 |
| 可見異物 |
符合規(guī)定 |
| pH值 |
7.5±8.5 |
| 活性 |
98U/ml-102U/ml |
| 純度 |
≥95% |
| 核酸內(nèi)切酶殘留 |
底物的降解不超過10% |
| 核酸外切酶殘留 |
底物的降解不超過10% |
| RNA酶殘留 |
底物的降解不超過10% |
| 細菌內(nèi)毒素含量 |
≤10EU/ml |
| 外源性DNA殘留 |
≤100pg/mg |
| 宿主蛋白質(zhì)殘留 |
≤50ppm |
| 支原體檢測 |
陰性 |
| 重金屬殘留 |
≤10ppm |
|
遵循以下規(guī)范生產(chǎn)
1. ISO 9001:2015, certified facility。
2. 《GMP 附錄-細胞治療產(chǎn)品》國家藥品監(jiān)督管理局。
3. 《人用基因治療總論-中國藥典 2020》國家藥典委。
4. USP Chapter <1043>, Ancillary Materials for Cell, Gene, and Tissue-Engineered Products 用于細胞治療，基因治療和組織工程產(chǎn)品中的輔料。
5. USP Chapter <92>, Growth Factors and Cytokines Used in Cell Therapy Manufacturing 細胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)過程中細胞因子和生長因子。
6. Ph. Eur. General Chapter 5.2.12, Raw Materials of Biological Origin for the Production of Cell-based and Gene Therapy Medicinal Products 用于生產(chǎn)細胞或基因治療藥物的生物來源原料。
產(chǎn)品特點
1. 水解無機焦磷酸鹽 。
2. DNA合成：顯著增強 DNA復(fù)制能力 。
3. RNA合成：體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中提高 RNA 產(chǎn)量 。
4. 最佳反應(yīng)溫度為25℃，65℃ 10min可使該酶失活。
產(chǎn)品用途
1. 優(yōu)化 RNA轉(zhuǎn)錄：提高體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的 RNA產(chǎn)量 。
2. 去除利用焦磷酸鹽測定法來進行 SNP基因分型的試劑中的 PPi污染物 。
3. 促進蛋白質(zhì)、 RNA和 DNA的合成 。
4. 催化 PPi + H2O→2Pi的反應(yīng)。
5.?ssr-pcr optimization：Improve efficiency and increase DNA production.
活性定義
標準反應(yīng)條件下每分鐘催化無機焦磷酸鹽生成 1 μmol 磷酸鹽所需的酶量定義為 1 個活性單位。?
保存體系
20 mM Tris-HCl; 100 mM NaCl; 1 mM DTT; 0.1 mM EDTA; 50% (v/v) Glycerol; pH 8.0。?
保存溫度
-20±5 ℃。
注意事項
1. 該酶在多種反應(yīng) Buffer 中均具有活性，通常該酶在 HDA、LAMP 等實驗中，直接加入即可。
2. 該酶的用量在不同的實驗中需要優(yōu)化，通常在 0.05~1U/ml 濃度調(diào)整。
3. 該酶的最佳反應(yīng)溫度為 25℃，其在 16~37℃均有活性，65℃ 10min 可使該酶失活。
4. 輔因子：Mg2+對于酶發(fā)揮活性是必須的。
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