中文名：富馬酸檢測試劑盒

英文名：Fumarate Assay Kit

純度：96T

貨號：F486219

包裝：1kit

存儲溫度：-20°C儲存

產(chǎn)品介紹：

本試劑盒僅供研究使用。

使用目的：?

本試劑盒用于測定樣本中延胡索酸(fumric cid)的含量。?

實驗原理：?

本試劑盒應(yīng)用酶聯(lián)免疫競爭法測定標(biāo)本中延胡索酸(fumric cid)水平。用純化的延胡索酸(fumric cid)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入延胡索酸(fumric cid)，和 HRP 標(biāo)記的延胡索酸(fumric cid)抗原，使它們競爭結(jié)合，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB 顯色。樣本顏色的深淺和樣品中的延胡索酸(fumric cid)的含量呈負(fù)相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中延胡索酸(fumric cid)的含量。

試劑盒組成：
1. 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶
2. 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶
3. 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條
4. 顯色劑 A 液 6ml×1 瓶
5. 顯色劑 B 液 6ml×1 瓶
6. 終止液 6ml×1/瓶
7. 樣品稀釋液 6ml×1/瓶
8. 標(biāo)準(zhǔn)品 S1（200ng/L） 0.5ml×1 瓶
標(biāo)準(zhǔn)品 S2（100ng/L） 0.5ml×1 瓶
標(biāo)準(zhǔn)品 S3（50ng/L） 0.5ml×1 瓶
標(biāo)準(zhǔn)品 S4（25ng/L ） 0.5ml×1 瓶
標(biāo)準(zhǔn)品 S5（12.5ng/L） 0.5ml×1 瓶
9.? 封板膜 2 張?

標(biāo)本要求 ：

1．標(biāo)本處理：（1）水樣 采集后經(jīng) -20℃反復(fù)凍融三次，再經(jīng)玻璃纖維過濾后，備查 （2）組織 樣品用丁醇：甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提，或按相 關(guān)文獻(xiàn)提取進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗， 可將標(biāo)本放于-20℃保存，備查?

2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。?

操作步驟：

1. 加樣：分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔、空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、 待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)孔中加 50 微升，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl， 然后再加待測樣品 10μl（樣品最終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

2. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。?

3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 60 分鐘。?

4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用?

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復(fù) 5 次，拍干。

6. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 15 分鐘.?

7. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。?

8. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 ?

計算：

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的 OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計算出標(biāo) 準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)， 即為樣品的實際濃度。

注意事項：

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 1 小時后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完， 板條應(yīng)裝入密封袋中保存。?

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。?

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好 控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。?

4． 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD 值 大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計 算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。?

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。?

7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).?

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。?

9．本試劑不同批號組分不得混用。 ?

檢測范圍：

4ng/L -250ng/L?

保存條件及有效期：

1．試劑盒保存：2-8℃。?

2．有效期：6 個月

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