中文名：DiO Plus（細(xì)胞膜綠色熒光探針升級(jí)款）

英文名：Dio plus (cell membrane green fluorescent probe upgrade)

貨號(hào)：D598343

包裝：50mg、5mg

存儲(chǔ)溫度：2-8°C儲(chǔ)存,避光

產(chǎn)品介紹：

DiO Plus效能等同于Neuro-DiO。DiO Plus是一種代替膜綠色熒光染料DiO的新型染料，DiO由于其溶解度低、易形成聚合物和橫向擴(kuò)散速度緩慢等缺點(diǎn)，很難用于神經(jīng)元和細(xì)胞懸液的研究。DiO Plus和DiO具有幾乎相同的吸收光譜和發(fā)射光譜，但前者具有更好的膜溶解性，并且不形成非熒光性的聚集體，通常這也會(huì)減慢染料在膜上的擴(kuò)散速率。DiO Plus染色后可進(jìn)行多聚甲醛（不可使用甲醇等其他試劑）的固定，但不建議在染色后進(jìn)行透化的過(guò)程。此外，在固定透化（室溫下用0.1% TritonX-100 透化）后，也可以很好地進(jìn)行質(zhì)膜染色。以每次使用100 μL染色工作液，染色工作液濃度3 μM計(jì)算，10 mg配置為工作液大概可以用15346次。

產(chǎn)品參數(shù)：

Ex/Em (MeOH) = 484/501 nm

應(yīng)用范圍：

細(xì)胞膜熒光染料；神經(jīng)元順行和逆行示蹤；細(xì)胞長(zhǎng)期示蹤

使用方法：
1. 染色液制備
（1）配置 DMSO 或 EtOH 儲(chǔ)存液：儲(chǔ)存液用 DMSO 或 EtOH 配置濃度 1~5 mM。
注：未使用的儲(chǔ)存液分裝儲(chǔ)存在-20℃，避免反復(fù)凍融。
（2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無(wú)血清培養(yǎng)基，HBSS 或 PBS）稀釋儲(chǔ)存液，配制濃度為 1~5 μM 的工作液。
注：工作液最終濃度建議根據(jù)不同細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)體系來(lái)優(yōu)化建議從推薦濃度的 10 倍范圍內(nèi)開(kāi)始最優(yōu)濃度的摸索。
2. 懸浮細(xì)胞染色
（1）加入適當(dāng)體積的染色工作液重懸細(xì)胞，使其密度為 1×106/mL。
（2）37℃孵育細(xì)胞 20 min，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同?？梢?20 min 作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。
（3）孵育結(jié)束，1000~1500 rpm 離心 5 min。傾倒上清液，再次緩慢加入 37℃預(yù)熱的生長(zhǎng)培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。
（4）重復(fù)步驟（3）兩次以上。
3. 貼壁細(xì)胞的染色
（1）將貼壁細(xì)胞培養(yǎng)于無(wú)菌蓋玻片上。
（2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過(guò)量培養(yǎng)液，但表面要保持濕潤(rùn)。
（3）在蓋玻片的一角加入 100 μL 的染料工作液，輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。
（4）37℃孵育細(xì)胞 2~20 min，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同?？梢?20 min 作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。
（5）吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片 2~3 次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，孵育 5~10 min，然后吸干培養(yǎng)基。但要使表面保持濕潤(rùn)。
4. 結(jié)果檢測(cè)
樣品可在培養(yǎng)基中進(jìn)行檢測(cè)，可以通過(guò)熒光顯微鏡成像或流式細(xì)胞儀分析。?

注意事項(xiàng)：
1. 使用前請(qǐng)將產(chǎn)品瞬時(shí)離心至管底，再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2. DiO Plus 染色固定的細(xì)胞或組織樣品時(shí)，通常使用配制在 PBS 中的 4%多聚甲醛進(jìn)行固定，使用其它不適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ簳?huì)導(dǎo)致熒光背景較高。
3. 熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
4. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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