產(chǎn)品名稱：人乳腺癌細胞（三陰性）BT20
傳代方法 | 次建議1:2傳代 | 凍存條件 | 無血清凍存液（貨號：C7001） |
細胞描述 | 本庫的細胞僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫細胞轉讓給第三者。 |
培養(yǎng)備注 | 用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過渡培養(yǎng) |
人乳腺癌細胞（三陰性）BT20收到后處理
細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)霓k法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基）
人乳腺癌細胞（三陰性）BT20培養(yǎng)步驟
一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi)，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。
三、細胞凍存：（注：無血清凍存液凍存細胞的方法請參考我司官網(wǎng)貨號：C7001）
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、用適量的凍存液重懸細胞，并放置于凍存管中；
4、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃
人乳腺癌細胞（三陰性）BT20部分相關細胞如下：
YS1514 NCIH1781 人細支氣管肺泡癌細胞NCIH1781
YS1515 NCIH1581 人非小細胞肺癌細胞NCIH1581
YS1516 HBEC5i 人大腦內(nèi)皮細胞HBEC5i
YS1517 HuNS1 人多發(fā)性骨髓瘤細胞HuNS1
YS1518 RL 人B細胞非霍奇金淋巴瘤細胞RL
YS1519 MD 人脾細胞MD
YS1520 RC 人B淋巴瘤細胞RC
YS1521 SW684 人纖維肉瘤細胞SW684
YS1522 PhoenixECO 人逆轉錄病毒包裝細胞系PhoenixECO
YS1523 BICR3 人舌鱗狀細胞癌BICR3
YS1524 OE19 人食管癌細胞OE19
YS1525 SNU601 人印戒細胞胃腺癌SNU601
YS1526 SNU1066 人喉鱗狀細胞癌SNU1066
YS1527 SNU46 人喉鱗狀細胞癌SNU46
YS1528 MNT1 人黑色素瘤細胞MNT1
YS1529 HARSpondin1FcHEK293Tcells 人穩(wěn)定表達RspoI蛋白的293T細胞HARSpondin1FcHEK293Tcells
YS1530 MUGChor1 人骶骨脊索瘤細胞MUGChor1
YS1531 SNU899 人喉鱗狀細胞癌SNU899
YS1532 SNU1076 人喉鱗狀細胞癌SNU1076
YS1533 TK6 人成淋巴細胞/遺傳性球形紅細胞增多癥TK6
YS1534 LUDLU1 人肺鱗狀細胞癌細胞LUDLU1
YS1535 UMChor5 人顱底脊索瘤細胞UMChor5
YS1536 MP46 人眼葡萄膜黑色瘤細胞MP46
YS1537 NCIH187 人小細胞肺癌細胞NCIH187
YS1538 MOLT3 人急性T淋巴細胞白血病細胞MOLT3
YS1539 LL97A(AlMy) 人肺成纖維細胞-原發(fā)性肺纖維化LL97A(AlMy)
YS1540 SW962 人外陰癌細胞SW962
YS1541 SW872 人脂肪肉瘤細胞SW872
YS1542 NALM1 人慢性粒細胞白血病細胞NALM1
YS1543 NCIH2030 人肺腺癌細胞NCIH2030
YS1544 Loucy 人急性T淋巴細胞白血病Loucy
YS1545 NTERA2 人惡性多發(fā)性畸胎瘤細胞NTERA2
YS1546 HCC1395 人乳腺癌細胞（三陰性）HCC1395
YS1547 SKNO1 人急性髓系白血病細胞SKNO1
YS1548 NTERA2clD1 人睪丸癌細胞NTERA2cl.D1
YS1549 Huh1 人肝癌細胞Huh1
YS1550 HCC1806 人乳腺鱗狀癌細胞（三陰性）HCC1806
YS1551 OCILy7 人彌漫大B淋巴瘤細胞OCILy7
YS1552 HCC1954 人乳腺導管癌細胞TNMIIA期，3級www.atcc.org/products/crl-2338HCC1954
YS1553 BT20 人乳腺癌細胞（三陰性）BT20
YS1554 LAPC4 人前列腺癌細胞LAPC4
YS1555 OPM2 人多發(fā)性骨髓瘤細胞OPM2
YS1556 SUDHL8 人B細胞淋巴瘤SUDHL8
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