中文名：DiD（細(xì)胞膜紅色熒光探針）
英文名：Did (cell membrane red fluorescent probe)
貨號(hào)：D598346
包裝：10mg
Cas號(hào)：362596-00-7
存儲(chǔ)溫度：避光,-20°C儲(chǔ)存
產(chǎn)品介紹：
?DiD染料是親脂性熒光染料家族成員之一，它可以用來(lái)染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。當(dāng)DiD與細(xì)胞膜結(jié)合后其熒光強(qiáng)度大大增強(qiáng)，這類染料有著很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。一旦對(duì)細(xì)胞染色，這類染料在整個(gè)細(xì)胞膜上擴(kuò)散，最佳濃度時(shí)可以使整個(gè)細(xì)胞膜染色。DiD（遠(yuǎn)紅色熒光）可以用來(lái)對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行成像和流式分析。DiD可以用633 nm He–Ne激光器激發(fā)，有著比DiI（一種常見的細(xì)胞熒光染料）更長(zhǎng)的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)，在細(xì)胞和組織染色中更有價(jià)值。 DiD染色后可進(jìn)行多聚甲醛（不可使用甲醇等其他試劑）的固定，但不建議在染色后進(jìn)行透化的過(guò)程。此外，在固定透化（室溫下用0.1% TritonX-100 透化）后，也可以很好地進(jìn)行質(zhì)膜染色。 以每次使用100 μL染色工作液，染色工作液濃度5 μM計(jì)算，10 mg配置為工作液大概可以用19009次。
產(chǎn)品參數(shù)：
Ex/Em (MeOH) = 644/663 nm
注意事項(xiàng)：
1. 使用前請(qǐng)將產(chǎn)品瞬時(shí)離心至管底，再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 2. DiD染色固定的細(xì)胞或組織樣品時(shí)，通常使用配制在PBS中的4%多聚甲醛進(jìn)行固定，使用其它不適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ簳?huì)導(dǎo)致熒光背景較高。 3. 熒光染料均存在淬滅問題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。 4. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
應(yīng)用范圍：
細(xì)胞膜熒光染料；神經(jīng)元順行和逆行示蹤；細(xì)胞長(zhǎng)期示蹤
使用方法：
1.染色液制備
（1）配制儲(chǔ)液：儲(chǔ)液用無(wú)水DMSO或EtOH配制，濃度1~5mM。
注：未使用的儲(chǔ)存液分裝儲(chǔ)存在-20°C，避免反復(fù)凍融。
（2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無(wú)血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲(chǔ)液，配制濃度為1~5μM的工作液。
注：工作液最終濃度建議根據(jù)不同細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)體系來(lái)優(yōu)化。建議從推薦濃度的10倍范圍內(nèi)開始最優(yōu)濃度的摸索。
2.懸浮細(xì)胞染色
（1）加入適當(dāng)體積的染色工作液重懸細(xì)胞，使其密度為1×106/mL。
（2）37°C孵育細(xì)胞2~20 min，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同?？梢?0 min作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記效果。
（3）孵育結(jié)束，1000~1500 rpm離心5 min。傾倒上清液，再次緩慢加入37°C預(yù)熱的生長(zhǎng)培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。
（4）重復(fù)步驟（3）兩次以上。
3.貼壁細(xì)胞染色
（1）將貼壁細(xì)胞培養(yǎng)于無(wú)菌蓋玻片上。
（2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過(guò)量培養(yǎng)液，但要使表面保持濕潤(rùn)。
（3）在蓋玻片的一角加入100 μL的染料工作液，輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。
（4）37°C孵育細(xì)胞2~20 min，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同?？梢?0 min作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記的效果。
（5）吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2~3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，孵育5~10 min，然后吸干培養(yǎng)基。但要使表面保持濕潤(rùn)。
4. 結(jié)果檢測(cè)
樣品可在培養(yǎng)基中進(jìn)行檢測(cè)，可通過(guò)熒光顯微鏡成像或流式細(xì)胞儀分析。?
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