| 描述 | Pitolisant鹽酸鹽(BF2.649;Ciproxidine)是新型的人重組H3受體選擇性反向激動(dòng)劑,Ki為0.16 nM。 |
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| 相關(guān)類別 | 信號(hào)通路 >> G 蛋白偶聯(lián)受體/G 蛋白 >> 組胺受體 信號(hào)通路 >> 免疫及炎癥 >> 組胺受體 研究領(lǐng)域 >> 神經(jīng)疾病 |
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| 靶點(diǎn) | Ki: 0.16 nM (H3 receptor)[1] EC50: 1.5 nM (H3 receptor)[1] |
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| 體外研究 | 在鳥苷5'-O-(3- [35S]硫代)三磷酸與這種受體結(jié)合的刺激下,Pitolisant(BF2.649)表現(xiàn)為競(jìng)爭(zhēng)性拮抗劑,Ki值為0.16 nM,并且作為EC50的反向激動(dòng)劑值為1.5 nM,內(nèi)源活性比環(huán)丙二酚高約50％。 Pitolisant取代了小鼠腦皮質(zhì)膜中[125I]碘丙酸的結(jié)合,IC50值為26.4±4.5 nM?？紤]到放射性配體的Kd值(161±9 pM),推斷的Pitolisant的Ki值為14±1 nM。 Pitolisant取代穩(wěn)定表達(dá)人H3受體的大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞膜的[125I]碘丙氧基結(jié)合,IC50值為4.2±0.2nM?？紤]到放射性配體的Kd值(50±4 pM),推斷的Pitolisant的Ki值為2.7±0.5 nM。 Pitolisant逐漸逆轉(zhuǎn)此響應(yīng),希爾系數(shù)接近于1,IC50值為330±68 nM,導(dǎo)致Ki值為17±4 nM。 Pitolisant引起基底特異性[35S]GTPγS與膜結(jié)合的劑量依賴性降低,最大效應(yīng)相當(dāng)于基礎(chǔ)特異性結(jié)合的75±1％,EC50值為1.5±0.1nM [1]。 |
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| 體內(nèi)研究 | 在單劑量奧氮平(2 mg/kg體重)前30分鐘給予Pitolisantat單劑量10 mg/kg也會(huì)顯著影響FST的不動(dòng)時(shí)間。與在FST中對(duì)照組中測(cè)定的時(shí)間相比,隨后在小鼠中施用上述藥物序列在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著增加了不動(dòng)的持續(xù)時(shí)間。它也降低了運(yùn)動(dòng)活動(dòng)。相反,在兩次給藥15次后給予亞慢性治療的結(jié)果(Pitolisant 10mg/kg體重,并且在奧氮平2mg/kg體重30分鐘后,以及4小時(shí)奧氮平2mg/kg體重后再次)顯示給藥Pitolisant接著是Olanzapine,均衡了小鼠的運(yùn)動(dòng)活動(dòng);與對(duì)照組的運(yùn)動(dòng)水平相比,只有Pitolisant給藥。更重要的是,這種藥物組合顯著降低了不動(dòng)時(shí)間,達(dá)到了小鼠強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)中對(duì)照組的水平[單因素方差分析; F(3,20)= 4.226,P = 0.0181] [2]。在調(diào)理階段給予Pitolisant(10 mg/kg)的大鼠在成對(duì)質(zhì)地上保持502±94 s,這個(gè)值與對(duì)照組沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,表明Pitolisant不支持位置偏好[3]。 |
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| 激酶實(shí)驗(yàn) | [35S]進(jìn)行GTPγS結(jié)合測(cè)定。將穩(wěn)定表達(dá)人H3受體（~400fmol / mg蛋白）的CHO-K1細(xì)胞在冰冷的緩沖液（50mM Tris / HCl，pH7.4）中勻漿。將勻漿物離心兩次（20,000g，在4℃下10分鐘），并將最終的沉淀重懸于50體積的緩沖液中。將膜（550μg蛋白質(zhì)）用腺苷脫氨酶（1U / mL）預(yù)處理，并在25℃下與0.1nM [35S]GTPγS孵育60分鐘，并在最終體積為1mL的測(cè)定緩沖液中測(cè)試待測(cè)藥物（50mM Tris / HCl，50mM NaCl，5mM MgCl2,10μMGDP，和0.02％牛血清白蛋白，pH7.4）。使用10μM非放射性GTPγS測(cè)定非特異性結(jié)合。通過(guò)GF / B玻璃纖維過(guò)濾器在真空下快速過(guò)濾來(lái)終止孵育。用冰冷的水洗滌后，通過(guò)液體閃爍光譜法計(jì)算捕集在過(guò)濾器上的放射性。類似的測(cè)定用于評(píng)估競(jìng)爭(zhēng)性拮抗作用。簡(jiǎn)而言之，穩(wěn)定表達(dá)人H3受體（~600 fmol / mg蛋白）的HEK-293細(xì)胞膜（10μg蛋白）在Pitolisant存在于緩沖液（50 mM Tris / HCl，pH 7.4,10 mM）中預(yù)孵育在96孔微量培養(yǎng)板中，在室溫（19-20℃）溫和攪拌下，MgCl 2,100mM NaCl和10μMGDP），然后加入0.1nM [35S]GTPγS（終體積200μL）。使用10μM濃度的非放射性GTPγS測(cè)定非特異性結(jié)合。 30分鐘后，通過(guò)在Multiscreen MAFCOB50微孔板上真空快速過(guò)濾來(lái)終止一式三份的溫育。通過(guò)液體閃爍光譜法計(jì)算捕集在過(guò)濾器上的放射性[1]。 |
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| 動(dòng)物實(shí)驗(yàn) | 小鼠[2]在該研究中使用重20-22g的成年雌性Albino Swiss小鼠。將奧氮平或Pitolisant懸浮于1％吐溫80中。在急性實(shí)驗(yàn)前30分鐘腹膜內(nèi)（ip）施用化合物或媒介物。在Pitolisant + Olanzapine組中，在Olanzapine前15分鐘給予Pitolisant。亞臨床治療在上午9點(diǎn)左右進(jìn)行（對(duì)照組為0.2 mL Tween，Pitolisant組為10 mg / kg bw，Olanzapine組為奧氮平-2 mg / kg bw，10％/ kg bw和Olanzapine） 15分鐘-2 mg / kg體重計(jì)至Pitolisant + Olanzapine組）和下午1:00左右（Olanzapine組和Pitolisant + Olanzapine組）。大鼠[3]雄性Wistar大鼠（220-300g）接受載體（甲基纖維素1％，po），Pitolisant（10mg / kg，po）或D-苯丙胺（2.5mg / kg，在鹽水中ip）。 90分鐘后，它們被斷頭處死，并將伏隔核解剖出來(lái)，稱重，在液氮中冷凍并儲(chǔ)存在-80℃。將組織在1mL 0.4N高氯酸/2.7mM EDTA溶液中勻漿。離心（8000rpm，20分鐘，4℃）后，通過(guò)與電化學(xué)檢測(cè)偶聯(lián)的HPLC分析上清液。測(cè)定多巴胺（DA），二羥基苯乙酸（DOPAC）和高香草酸（HVA）的組織濃度，并計(jì)算相應(yīng)的比率（DOPAC / DA，HVA / DA）。 |
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| 參考文獻(xiàn) | [1]. Ligneau X, et al. BF2.649 [1-{3-[3-(4-Chlorophenyl)propoxy]propyl}piperidine, hydrochloride], a nonimidazole inverse agonist/antagonist at the human histamine H3 receptor: Preclinical pharmacology. J Pharmacol Exp Ther. 2007 Jan;320(1):365-75. [2]. Dudek M, et al. H3 histamine receptor antagonist pitolisant reverses some subchronic disturbances induced by olanzapine in mice. Metab Brain Dis. 2016 Oct;31(5):1023-9. [3]. Uguen M, et al. Preclinical evaluation of the abuse potential of Pitolisant, a histamine H? receptor inverse agonist/antagonist compared with Modafinil. Br J Pharmacol. 2013 Jun;169(3):632-44. |
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