產(chǎn)品概述T7 RNA Polymerase,即T7 RNA聚合酶,是一種對(duì)T7噬菌體啟動(dòng)子具有高度特異性的DNA依賴性RNA聚合酶。該酶以含有T7啟動(dòng)子序列的單鏈或雙鏈DNA為模板,以NTP為底物,合成與T7啟動(dòng)子下游的DNA一條鏈互補(bǔ)的RNA。產(chǎn)品組分
產(chǎn)品基本信息
產(chǎn)品應(yīng)用用于單鏈RNA合成,包括mRNA,siRNA,gRNA等各類RNA前體。以及合成RNA探針,還可以利用帽類似物合成加帽RNA。實(shí)驗(yàn)流程1、將各組分解凍分別混勻后,短暫離心使液體收集于管底,置于冰上。2、體外轉(zhuǎn)錄體系
3、混勻、離心、37℃反應(yīng)2-3 h。4、(選做)向反應(yīng)體系中加入Dnase I,37℃孵育15 min,消化DNA模板。注意事項(xiàng)
模板DNA的純度對(duì)體外轉(zhuǎn)錄過程影響很大。模板制備過程中的RNase殘留會(huì)影響體外轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的RNA質(zhì)量。模板DNA應(yīng)為RNase-Free、高純度,建議OD260/280為1.8~2.0。
添加體系時(shí),模板最后加入。Transcription Buffer (10 ×)中含有亞精胺,亞精胺濃度過高會(huì)引起DNA模板沉淀。
反應(yīng)體系中可添加RNase Inhibitor,防止RNase污染。建議20 μL體系中添加4 U RNase Inhibitor。
反應(yīng)體系中可添加Pyrophosphatase, Inorganic,提高RNA產(chǎn)量。建議20 μL體系中添加0.02 U Pyrophosphatase, Inorganic。
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