中文名:汽巴藍(lán)瓊脂糖(藍(lán)膠)
英文名:Cibacron Blue Agarose
英文別名:Cibacron Blue|84166-13-2|Cibacron Blue 3G-A|Cibacron blue 3GA|1-amino-4-[4-[[4-chloro-6-(2-sulfoanilino)-1,3,5-triazin-2-yl]amino]-3-sulfoanilino]-9,10-dioxoanthracene-2-sulfonic acid|CHEMBL572528|GST Inhibitor-1 (Cibacron Blue 3G-A, Sodium Salt)|1-Amino-
貨號(hào):C377819
包裝:10ml、1ml、50ml
Cas號(hào):84166-13-2
存儲(chǔ)溫度:2-8°C儲(chǔ)存
產(chǎn)品介紹:
煙酸藍(lán)瓊脂糖可用于分離需要NAD +和NADP,白蛋白,干擾素,類固醇受體和25-二羥基維生素D3受體的酶。已經(jīng)顯示它可以結(jié)合幾種與核苷酸輔因子具有已知親和力的酶。煙酸藍(lán)瓊脂糖也已顯示出結(jié)合脫氫酶,激酶,限制性核酸內(nèi)切酶,白蛋白和干擾素的能力。
產(chǎn)品性能:
外觀 | 藍(lán)色漿狀物,球形,表面光滑 | 基質(zhì) | 0.06高度交聯(lián)瓊脂糖 | 配基 | 汽巴藍(lán) | 配基濃度 | 7.3mg/mL 介質(zhì) | 動(dòng)態(tài)結(jié)合載量 | >18mgHSA /mL 介質(zhì) | 推薦流速 | <300cm/h(根據(jù)柱尺寸調(diào)整) | 粒徑范圍 | 45~ 165μm(平均粒徑 90μm) | 耐受耐壓 | 0.3MPa | 耐受?pH | 長(zhǎng)期:4~ 12;短期:3- 13 | 化學(xué)穩(wěn)定性 | 8M 尿素,6M 鹽酸胍,70%乙醇 | 保存 | 保存:20%乙醇, 2~8℃ , 冷藏更佳,切勿冷凍,定期更換保 存溶液。 | 清洗與再生 | 可用 1M NaOH 溶液浸泡 1~2 h 以達(dá)到滅菌效果;根據(jù)污染物 類型用 1M NaOH 、2M NaCl 、70%乙醇、30%異丙醇、超純 水等沖洗多個(gè)柱體積到達(dá)清洗再生的效果。 |
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產(chǎn)品使用:1. 填料準(zhǔn)備
根據(jù)需要由公式:介質(zhì)體積=柱高×截面積×壓縮因子(壓縮因子=1. 15)計(jì)算C377819 介質(zhì)體積;真空抽濾去除介質(zhì)保存溶液,再用超純水反復(fù)抽洗,最后將介質(zhì)用超純水或平衡待用緩沖液混成 50-75%的懸浮液備用(溶液需要經(jīng)過(guò)孔徑為 0.45 或0.22μm濾膜過(guò)濾并脫氣處理);或用超純水置換保存液至乙醇含量小于 2% ,然后將介質(zhì)用超純水或平衡待用緩沖液混成 50-75%的懸浮液備用。
2. 層析柱準(zhǔn)備
事先將層析柱消毒、洗凈,用超純水或待用緩沖液沖洗柱壁,并排除層析柱上下兩端適配器中的氣泡,將層析柱底部適配器與柱體連接,關(guān)閉柱底閥門(mén),向?qū)游鲋屑尤?3cm左右高度緩沖液/超純水,靜置 5min ,檢查是否漏液。
3. 裝入柱料
將層析柱固定,連接裝柱器(如果需要),用水平尺校正水平,將上述介質(zhì)懸浮液攪拌均勻,在玻璃棒的引流下,沿層析柱內(nèi)壁一次性裝入,避免引入氣泡;待層析介質(zhì)自然沉降后,層析柱上端適配器連接儀器泵或者蠕動(dòng)泵,排除適配器中氣泡后安裝適配器至膠面上 2-3cm ,避免使介質(zhì)重新懸起。
4. 壓柱
為得到理想柱效,應(yīng)先以較低流速讓液體緩慢流過(guò)層析柱,再逐漸增加至最大壓柱流速,確保裝柱時(shí)壓力不超過(guò) 0.3MPa ,走流速直至層析柱中膠面高度不再變化,標(biāo)記膠面位置,停泵,將上端適配器壓至標(biāo)記高度下 0.5cm ,鎖緊適配器,封堵出口,完成裝柱。如果使用裝柱器,待裝柱器中的層析介質(zhì)全部壓入柱體內(nèi),卸下裝柱器,連接柱體上端適配器,將柱頭下降至膠面上 0.5cm ,再次壓柱,標(biāo)記膠面位置,停泵,將上端柱桿下壓至標(biāo)記高度下 0.5cm ,鎖緊適配器,封堵出口,完成裝柱。
5. 柱效測(cè)試
5. 1 柱效測(cè)定
柱效是衡量色譜柱性能的一項(xiàng)重要指標(biāo),主要有兩種柱效測(cè)試方法:一種是用丙酮,另一種是用氯化鈉;前者是在 UV280nm 條件下測(cè)定紫外吸收峰,后者是考察電導(dǎo)峰。
| 方法一 | ?方法二 | 樣? 品 | 0.01(V/V)丙酮水溶液 | 0.8~2M NaCl?溶液 | 緩沖液 | 去離子水 | 0.4M NaCl?溶液 | 上樣量 | 0.01柱體積 | 0.01柱體積 | 流 速 | 15~30 cm/h | 15~30cm/h | 檢測(cè)器 | UV280nm | 電導(dǎo)率儀 |
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5.2 柱效計(jì)算(HETP 和 AS 計(jì)算方法)
根據(jù) UV 和電導(dǎo)率曲線計(jì)算理論塔高度(HETP)、理論塔板數(shù)(N)和非對(duì)稱因子
(As),公式如下:
N=5.54(VR/Wh)2
HETP=L/N
As=b/a
其中:VR :保留體積;Wh :50%峰高處的半峰寬;
VR 和 Wh 的單位應(yīng)一致;L:柱高;N:理論塔板數(shù);
a/b:將 10%峰高處前半峰的寬度設(shè)為 a, 同高度處后半峰的寬度設(shè)為 b;
5.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)
一般來(lái)說(shuō),當(dāng) HETP/填料粒徑(dp)=3(或 N>100000/平均粒徑/3),峰的非對(duì)稱因子(As)在 0.8- 1.8 之間,認(rèn)為柱效較高。
6. 清洗
用 0.5- 1.0M NaOH 清洗 2-3CV ,用超純水清洗至中性。
7. 平衡
根據(jù)樣品的穩(wěn)定性、活性、等電點(diǎn)選擇合適的緩沖液、pH 范圍,低 pH 5.5?8.5 和低離子強(qiáng)度 5?50mmol/L 結(jié)合緩沖液能促進(jìn)蛋白的結(jié)合,另外 0.1? 10mmol/L 的金屬離子(如 Mg2+ 、Ca 2+ 、Zn2+ 、Mn2+ 、Cu2+ 、Co2+ 、Fe3+和 Al3+)可以增強(qiáng)蛋白質(zhì)的結(jié)合。層析實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前需測(cè)定結(jié)合緩沖液電導(dǎo)、pH ,以合適的流速平衡層析柱,當(dāng)儀器檢測(cè)電導(dǎo)、pH 值達(dá)到結(jié)合緩沖液的初始值說(shuō)明層析柱平衡好,一般需要 2~5CV。
8. 上樣
可以用樣品環(huán)或泵等裝置上樣,樣品需經(jīng)孔徑為 0.45 或 0.2μm濾膜過(guò)濾并脫氣處理;樣品配制溶液應(yīng)盡可能與結(jié)合緩沖液一致,上樣量根據(jù)動(dòng)態(tài)結(jié)合載量或者實(shí)際測(cè)定載量來(lái)確定。
9. 清洗
上樣后繼續(xù)用平衡緩沖液清洗至紫外吸收值回歸基線。
10. 洗脫?
C377819層析介質(zhì)可以使用鹽濃度、pH 兩種洗脫類型,線性梯度、步級(jí)梯度、等度洗脫等方式,可分管收集后確定目的蛋白的洗脫條件。
11. 再生
C377819層析介質(zhì)在一次上樣、洗脫結(jié)束后,為確保下次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性,需用高濃度的鹽,比如 1~2M 氯化鈉沖洗層析柱,特殊情況下也可再用 0.5~ 1M 氫氧化鈉沖洗層析柱,注意,一定要用超純水或結(jié)合緩沖液將層析柱沖洗至離子強(qiáng)度、pH 穩(wěn)定方可繼續(xù)平衡再次使用。
12. 層析柱 CIP(Cleaning In Place)
C377819?在多次使用后,會(huì)結(jié)合并聚集大量雜蛋白,造成柱子堵塞,反壓增大,影響流速與載量,需要定期對(duì)層析柱清洗與再生,根據(jù)純化樣品情況選擇 CIP 方式。
① 選用 2M NaCl 沖洗多個(gè)柱體積以除去結(jié)合能力較強(qiáng)的物質(zhì);
② 選用 1M NaOH 溶液沖洗多個(gè)柱體積以除去沉淀、疏水性較強(qiáng)物質(zhì);
③選用 70%乙醇或 30%異丙醇沖洗多個(gè)柱體積以除去脂類物質(zhì)(使用高濃度有機(jī)溶劑時(shí),為避免氣泡產(chǎn)生,應(yīng)逐步增加有機(jī)溶劑濃度如采取梯度方式);沖洗結(jié)束后需要用超純水或緩沖液沖洗至電導(dǎo)、pH 穩(wěn)定。
13. 層析介質(zhì)儲(chǔ)存
清潔和再生后的層析介質(zhì)保存于 20%中,建議 4-30℃保存,建議 2-3 個(gè)月更換一次20%乙醇,防止乙醇揮發(fā)導(dǎo)致微生物滋生。
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關(guān)鍵字: Cibacron Blue;84166-13-2;Cibacron Blue 3G-A;Cibacron blue 3GA
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阿拉丁目前常備庫(kù)存試劑產(chǎn)品品種超過(guò)7萬(wàn)種,SKU總數(shù)超過(guò)46萬(wàn),產(chǎn)品線涵蓋了化學(xué)試劑、生化試劑、藥靶配體、蛋白質(zhì)和抗體等多個(gè)領(lǐng)域,是國(guó)內(nèi)少數(shù)化學(xué)試劑到生物試劑全面發(fā)展的國(guó)產(chǎn)試劑品牌,產(chǎn)品同步發(fā)布在我們國(guó)內(nèi)外電商平臺(tái)。