1．概要

這個軟骨藻酸（ASP）ELISA檢測方法可以很敏感的定量檢測軟骨藻酸的含量。軟骨藻酸是和健忘性貝類毒素相關的一類海藻產(chǎn)生的水溶性毒素。試劑盒用于定量或定性檢測檢測水樣和貝類樣品中軟骨藻酸的含量。貝類樣品需要進行樣品前處理。如果需要可以用傳統(tǒng)的方法例如HPLC,GC/MS來證實。

2．安全說明

試劑盒中的標準溶液里含有少量的軟骨藻酸。底物中包含有四甲基聯(lián)苯胺，終止液中含有稀硫酸。要避免皮膚和粘膜與終止液接觸，如果不小心接觸了請馬上用水沖洗。

3．保存和穩(wěn)定性

試劑盒應保存在2-8℃，不要冷凍。在使用之前要把試劑盒中的溶液回復到室溫（20-25℃）。有效期內試劑盒中的試劑都可以使用。

4．原理

試劑盒的原理是直接競爭ELISA法，通過特異性抗體來識別軟骨藻酸。當樣品中含有軟骨藻酸時，樣品中的軟骨藻酸與軟骨藻酸酶結合物競爭結合溶液中的軟骨藻酸抗體。軟骨藻酸抗體與包被在微孔板上的羊抗鼠二抗結合。經(jīng)過一步洗滌加入底物溶液，產(chǎn)生有色反應。產(chǎn)生的綠色的顏色深度與樣品中軟骨藻酸的含量成反比。加入反應停止液后使顏色由藍色轉變?yōu)辄S色。用酶標儀在450nm處測定吸光度值。通過繪制標準曲線來計算樣品中軟骨藻酸的含量。

5. 軟骨藻酸試劑盒的局限性和可能的干擾

對在水樣中經(jīng)常出現(xiàn)的多種有機物和無機物已近作過檢測對此試劑盒并無干擾。由于化合物的易變質性由基質反應引起的干擾是不可能完全避免的。操作不當也可能導致檢測結果錯誤，比如：試劑盒保存條件不對、錯誤的加液順序、試劑的量沒有加準確、孵育的時間太長或太短、孵育的溫度太高或太低。與其它檢測方法一樣對陽性結果要求通過其它傳統(tǒng)的方法來驗證。

6．軟骨藻酸測定的重要性

軟骨藻酸及其衍生物是一類海藻產(chǎn)生的水溶性毒素，主要是大亞灣擬菱形藻等微藻類生物。大亞灣擬菱形藻水華會導致貝類等濾食性生物體內軟骨藻酸的富集。ASP可以引起劑量依賴型的腹瀉、惡心、嘔吐癥狀。FDA對ASP的限量是20ppm。歐洲是20mgDA/kg。這個試劑盒可以檢測40個樣品（做兩個重復）。需要少量的樣品，檢測時間少于2小時。