新生小鼠原代心肌細(xì)胞分離試劑盒
一、產(chǎn)品基本信息
產(chǎn)品名稱 | Applied Cell? 新生小鼠原代心肌細(xì)胞分離試劑盒 |
貨 號(hào) | AC-1002016 |
規(guī) 格 | 1kit |
保存條件 | 詳見產(chǎn)品內(nèi)容 |
使用范圍 | 小鼠原代心肌細(xì)胞分離培養(yǎng) |
保質(zhì)期 | 12 個(gè)月 |
二、產(chǎn)品簡(jiǎn)介
新生小鼠心肌細(xì)胞分離試劑盒是埃澤思生物科技有限公司（Applied Cell?）開發(fā)的一款用于新生小鼠心臟原代心肌細(xì)胞分離和培養(yǎng)的產(chǎn)品。本產(chǎn)品提供一種簡(jiǎn)單高效的小鼠原代心肌細(xì)胞分離方法，該方法為基于心肌細(xì)胞的體外藥物篩選以及藥物評(píng)估提供了非常好的原料。在細(xì)胞分離中，充分優(yōu)化分離過程， 以及培養(yǎng)試劑，獲得高純度、高活性的原代心肌細(xì)胞。使用本試劑盒進(jìn)行細(xì)胞分離、培養(yǎng)的原代心肌細(xì)胞， 可表達(dá)心肌細(xì)胞蛋白標(biāo)記物和保持細(xì)胞收縮性。
三、產(chǎn)品特性
l 采用二級(jí)消化法，特異性除去非心肌細(xì)胞，獲得高純度心肌細(xì)胞。
l 細(xì)胞貼壁效果更好、活性更高。
l 分離心肌細(xì)胞產(chǎn)量更高，損失更少。
四、產(chǎn)品內(nèi)容
試劑 | 規(guī)格 | 數(shù)量 | 保存 |
Wash buffer | 125ml | 2 瓶 | 2-8℃ |
Mouse Cell Dissociation SolutionⅠ | 125ml | 1 瓶 | -20--80℃保存 |
Mouse Cell Dissociation SolutionⅡ | 125ml | 1 瓶 | -20--80℃保存 |
Mouse Cardiomyocytes Medium | 125ml | 2 瓶 | 2-8℃ |
Ready-to-use Gel | 100ml | 1 瓶 | 2-8℃ |
五、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
A. 使用 75%酒精擦拭試驗(yàn)臺(tái)；
B. 準(zhǔn)備酒精燈、酒精棉及用于盛放實(shí)驗(yàn)處理后小鼠的垃圾袋；
C. 剪刀、鑷子、微型鑷子等解剖用具需提前進(jìn)行滅菌處理；
D. 吸取適量 Wash Buffer 至培養(yǎng)皿中并放置于冰上（細(xì)胞房?jī)?nèi)操作）。
六、操作方法
1. 取心臟：
A. 左手捏住小鼠背部皮膚，使用酒精棉（95%酒精）擦拭小鼠胸腹，用解剖剪在小鼠劍突處正中線偏 左向上剪開，略壓胸骨，使心臟自然跳出，用彎鑷子勾住心臟根部，取出心臟，置于盛有遇冷 Wash buffer 的培養(yǎng)皿中。
B. 在解剖鏡下使用微型鑷子和解剖剪剪去心房。
2. 組織清洗和預(yù)消化：
A. 經(jīng)酒精擦拭后，將培養(yǎng)皿移入細(xì)胞房超凈工作臺(tái)，用遇冷的 Wash buffer 清洗 3 次，去除血污后， 將心臟剪成約 1mm3 的組織塊，再清洗 2 次，
3. 將組織塊移入培養(yǎng)瓶中，加入適量 Mouse Cell Dissociation SolutionⅠ后放入 4℃冰箱消化過夜。
注意：預(yù)消化時(shí)間可根據(jù)心臟數(shù)目進(jìn)行調(diào)整，最多不超過 24h。第二天：
1. 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：
水浴鍋溫度調(diào)至 37℃，將 Wash Buffer 放入水浴中加熱。把心臟從 4℃冰箱取出并將其中的心臟和消化液移入一個(gè)新的 50ml 離心管中，加入等量經(jīng)預(yù)熱的 Wash Buffer, 37℃水浴鍋中搖動(dòng)消化 1min 后棄上清；
2. 消化：
A. 在 50ml 離心管中加入 5ml Mouse Cell Dissociation SolutionⅡ，37℃水浴中搖動(dòng)消化 7min 后將上清液加入遇冷的 10ml Mouse Cardiomyocytes Culture Medium 中，混合均勻并置于冰上保持低溫。
注意：每次消化液使用的量可根據(jù)組織塊的多少進(jìn)行調(diào)整。
B. 重復(fù) 2.A 的步驟直至組織完全消化。注意：吸取上清時(shí)盡量避免吸出沉淀。
C. 將收集的上清在常溫下 1200rpm，離心 5min。輕輕吸除上清，用 Mouse Cardiomyocytes Culture Medium 重懸細(xì)胞。
3. 差速貼壁：
A. 將重懸的細(xì)胞經(jīng)過 100μm 濾網(wǎng)過濾，直接接種到培養(yǎng)皿中，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5%CO2） 中孵育 60-75min。
B. 取上清移至新的培養(yǎng)皿中，重新放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育 60-75min。注意：孵育時(shí)間根據(jù)培養(yǎng)皿貼壁能力可做適當(dāng)調(diào)整；
4. 細(xì)胞鋪板：
A. 將 Mouse Cardiomyocytes Culture Medium 預(yù)先在 37℃水浴中加熱。
B. 取出培養(yǎng)皿，將上清移入 15ml 離心管中，1200rpm，離心 5min，輕輕吸除上清，用已經(jīng)預(yù)先加熱至 37℃的 2ml Mouse Cardiomyocytes Culture Medium 重懸細(xì)胞。
C. 利用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，用臺(tái)盼藍(lán)檢測(cè)細(xì)胞存活率。
D. 根據(jù)所計(jì)的細(xì)胞數(shù)量使用 Mouse Cardiomyocytes Culture Medium 進(jìn)行稀釋調(diào)整細(xì)胞濃度， 將細(xì)胞移至包被好的孔板或培養(yǎng)皿中。
E. 將培養(yǎng)皿放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24h 后觀察細(xì)胞狀態(tài)，若細(xì)胞狀態(tài)佳且濃度合適，則可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
七、細(xì)胞形態(tài)圖
小鼠原代心肌細(xì)胞熒光染色
關(guān)鍵字： 小鼠原代心肌細(xì)胞分離培養(yǎng);心肌細(xì)胞分離;小鼠心臟原代心肌細(xì)胞;小鼠原代細(xì)胞試劑盒;上海埃澤思;
埃澤思生物總部位于上海，公司取名Applied Cell(應(yīng)用細(xì)胞)，是一家致力于為細(xì)胞治aize 療、再生埃澤思生物總部位于上海，公司取名AppliedCell(應(yīng)用細(xì)胞)，是一家致力于為細(xì)胞治療、再生醫(yī)學(xué)提供核心原料，以及研發(fā)服務(wù)（CRO ）和生物藥委托開發(fā)生產(chǎn)服務(wù)（CDMO）的生物科技公司。目前公司產(chǎn)品已經(jīng)涵蓋干細(xì)胞、免疫細(xì)胞治療全流程試劑原料。其中核心產(chǎn)品已經(jīng)完成美國(guó)FDADMF備案以及國(guó)家藥品評(píng)審中心（CDE）藥物原輔料備案，是國(guó)內(nèi)資質(zhì)最為齊全的細(xì)胞治療原料供應(yīng)商之一。目前，公司已與國(guó)內(nèi)6家細(xì)胞治療企業(yè)進(jìn)行細(xì)胞治療一類新藥聯(lián)合申報(bào)，一項(xiàng)日本一類新藥聯(lián)合申報(bào)。