分析微陣列(芯片)也稱為捕獲陣列。在這種技術(shù)中,在支撐表面上排列著一個(gè)抗體、適配體或新配體庫。這些被用作捕捉分子,因?yàn)槊恳粋€(gè)都與特定的蛋白質(zhì)結(jié)合。當(dāng)捕獲分子是抗體時(shí),它通常被稱為抗體(微)陣列。分析蛋白微陣列最具代表性的模型是抗體陣列。該陣列采用復(fù)雜的蛋白質(zhì)溶液,如細(xì)胞裂解液。利用各種檢測(cè)系統(tǒng)分析產(chǎn)生的結(jié)合反應(yīng),可以提供樣品中特定蛋白質(zhì)的表達(dá)水平信息,以及結(jié)合親和性和特異性信息。這種微陣列在比較不同溶液中的蛋白表達(dá)時(shí)特別有用。例如,細(xì)胞對(duì)某一特定因子的反應(yīng)可以通過比較特定物質(zhì)處理的細(xì)胞的裂解物或在某些條件下與控制細(xì)胞的裂解物一起生長來確定。另一種應(yīng)用是對(duì)病變組織的鑒定和分析。
從技術(shù)上講,蛋白質(zhì)組學(xué)研究中最常用的有兩種抗體陣列。其中一種是基于ELISA雙抗體夾心法,另一種是基于分析標(biāo)簽的ELISA直接法抗體陣列。
ELISA 雙抗體夾心法抗體陣列:
酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn) (ELISA) 是一種利用抗體和顏色變化或熒光信號(hào)強(qiáng)度來鑒別物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)。在固體支架上(通常是 NC 膜或玻片)固定有未知數(shù)量抗原的樣本,通過另一種特定于同一抗原的抗體進(jìn)行捕獲。將抗原固定后,加入檢測(cè)抗體,形成與抗原結(jié)合的復(fù)合物。檢測(cè)抗體可以與一種酶共價(jià)連接,也可以通過與酶或熒光素結(jié)合的次級(jí)抗體來檢測(cè)。在每一步之間,通常用溫和的洗滌劑溶液清洗,去除任何非特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)或抗體。在最終的洗滌步驟之后,通過添加酶底物或激光掃描儀激發(fā)的激光掃描來產(chǎn)生一個(gè)可見的信號(hào)來表明樣品中抗原的數(shù)量。
直接抗原標(biāo)記型抗體陣列:
另一種抗體陣列應(yīng)用的模型是"分析標(biāo)記"格式。在這種形式下,通過直接蛋白標(biāo)記檢測(cè)抗體捕獲后的蛋白質(zhì)。在直接標(biāo)記法中,復(fù)雜混合物中所有蛋白質(zhì)的共價(jià)標(biāo)記提供了一種檢測(cè)抗體微陣列孵育后的結(jié)合蛋白的方法。如果蛋白質(zhì)被標(biāo)記為標(biāo)簽,如生物素,信號(hào)從結(jié)合蛋白可以被放大。通過一個(gè)簡單的抗原標(biāo)記過程,樣品蛋白直接與生物素結(jié)合,消除了第二種抗體的需要來發(fā)展陣列信號(hào)。在這種格式中,非預(yù)期的抗體交互是不可能的,從而消除了數(shù)組面板大小的限制。
兩種抗體陣列對(duì)比:
SBI 抗體或蛋白質(zhì)玻璃芯片"LucidArray?"是化學(xué)發(fā)光膜陣列后的進(jìn)化陣列平臺(tái)。LucidArray? 使用 SCHOTT NEXTERION? 載玻片的平臺(tái)。這些玻片是由高質(zhì)量的硼硅酸鹽玻璃制成,具有超平面和低固有熒光,具有一個(gè)均勻的層,提供高共價(jià)耦合效率和非常低的背景。與基于NC膜的微陣列相比,基于載玻片的微陣列容易處理,且使用更低的樣本量(只要10μl /數(shù)組)。玻片也利用熒光信號(hào)讀出,允許比化學(xué)發(fā)光更廣泛的動(dòng)態(tài)檢測(cè)范圍。
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