4-Butylresorcinol 是一個苯酚衍生物,可以抑制酪氨酸酶,其IC50 值為 11.27 μM。
它表明4-丁基間苯二酚(4-正丁基間苯二酚)以濃度依賴性方式顯著抑制黑色素合成。此外,還發(fā)現(xiàn)它抑制酪氨酸酶的活性,酪氨酸酶是限速黑素酶。 4-丁基間苯二酚不誘導ERK,Akt活化或MITF降解,并且對cAMP反應元件結合蛋白(CREB)磷酸化沒有影響,其刺激MITF表達。 4-丁基間苯二酚強烈降低無細胞系統(tǒng)中的酪氨酸酶活性。此外,4-丁基間苯二酚與日扁柏醇組合顯示出累加效應,降低了MITF的表達.
簡言之,將Mel-Ab細胞培養(yǎng)在60mm培養(yǎng)皿中。在含有2%FBS的DMEM中與測試物質(zhì)(包括4-丁基間苯二酚)一起溫育4天后,用冰冷的PBS洗滌細胞,并用含有1%Triton X-100的磷酸鹽緩沖液(pH6.8)裂解。然后通過凍融破碎細胞,并通過以10000×g離心5分鐘澄清裂解物。在量化蛋白質(zhì)水平并用裂解緩沖液調(diào)節(jié)濃度后,將90μL每種裂解物置于96孔板的孔中,然后加入10μL的10mM L-DOPA。對照孔含有90μL裂解緩沖液和10μL10mML-DOPA
Mel-Ab細胞系是源自小鼠的自發(fā)永生化黑素細胞系,其產(chǎn)生大量黑色素。將Mel-Ab細胞在補充有10%胎牛血清(FBS),100nM TPA,1nM CT,50μg/ mL鏈霉素和50U / mL青霉素的DMEM中于37℃,5%CO 2中溫育。使用結晶紫測定法測定細胞活力。將細胞與測試物質(zhì)一起溫育24小時后,除去培養(yǎng)基并在室溫下用0.1%結晶紫的10%乙醇溶液染色5分鐘,然后用蒸餾水漂洗4次。
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