1.  簡介

本產(chǎn)品是利用SYBR Green能與雙鏈DNA相結(jié)合的特性而研制的Real Time PCR的專用試劑。制品中含有Real Time PCR反應(yīng)的最適濃度SYBR Green，是一種2×濃度的Premix Type試劑。實(shí)驗(yàn)時(shí)，PCR反應(yīng)液的配制簡單、方便。本品可以有效抑制非特異性的PCR擴(kuò)增，大大提高PCR的擴(kuò)增效率，可以進(jìn)行高靈敏度的Real Time PCR擴(kuò)增反應(yīng)。另外，本產(chǎn)品以cDNA作為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)，可以很好抑制由于cDNA中殘存mRNA對PCR反應(yīng)造成的阻害作用。本產(chǎn)品適合于快速Real Time PCR擴(kuò)增反應(yīng)，可以在寬廣的定量區(qū)域內(nèi)得到良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線，對靶基因進(jìn)行準(zhǔn)確定量、檢測，重復(fù)性好，可信度高。

2.  試劑組成

(25μL反應(yīng)×96次量)

SYBR Premix Ex Taq (2×Conc.) (1.50 mL)

3. 產(chǎn)品參數(shù)

(1) 適用于Real Time PCR反應(yīng)，快速、準(zhǔn)確地對目的基因進(jìn)行檢測、定量。

(2) 在2×濃度的Premix中，加入模板、引物、滅菌蒸餾水便可進(jìn)行Real Time PCR反應(yīng)，操作簡單方便。 

(3) 本產(chǎn)品擴(kuò)增具有高擴(kuò)增效率，高擴(kuò)增靈敏度，高擴(kuò)增特異性之特點(diǎn)。

(4) 在2×濃度的Premix中，可以很好抑制以cDNA作為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)，由于cDNA中殘存mRNA對PCR反應(yīng)造成的阻害作用。   

4. 操作步驟        

(1) 取出qPCR MIX，室溫融化并振蕩混勻，10,000rpm離心10s；

(2) 每25μL體系，上下游引物各加1μL，混勻后擴(kuò)增。

(3) 例：IQTM5型，ABI PRISM7500等使用薄壁管的儀器：循環(huán)條件：94℃→2分鐘，后94℃ 30秒→60℃ 30秒，72℃延伸30秒，40個(gè)循環(huán)。用戶需根據(jù)自己的引物設(shè)置相應(yīng)擴(kuò)增條件，

上述條件僅供參考。

注意事項(xiàng)

(1)  使用時(shí)請上下顛倒輕輕均勻混合，避免起泡，并經(jīng)輕微離心后使用。

(2)  本制品中含有熒光染料，保存制品或配制PCR反應(yīng)液時(shí)應(yīng)避免強(qiáng)光照射。

(3)  反應(yīng)液的配制、分裝請一定使用新的(無污染的)槍頭、Microtube等，盡量避免污染。

 本制品請于4℃避光保存，避免-20℃保存制品。-20℃反復(fù)凍融制品性能可能下降。