標本要求:石蠟/冰凍切片
在同一組織細胞標本上需要同時檢測兩種抗原 時,需進行雙重熒光染色。雙重免疫熒光標記法(double immunofluorescence labeling method)也分為直接法和間接法。
(1)直接法雙重免疫熒光標記:將標記有兩種不同熒光素的抗體(如抗A和抗B)以適當比例混合,滴加在標本上孵育,然后洗去未結合的熒光抗體,在熒光顯微鏡下分別選擇兩種相應的激發(fā)濾片觀察,即可對兩種抗原 進行定位和定量。直接法簡便可靠,但靈敏度較低。
(2)間接法雙重免疫熒光標記:用未標記的兩種特異性抗體孵育組織或細胞,洗去多余的抗體后,再用兩種不同的熒光素分別標記的第二抗體孵育組織或細胞,洗去多余的第二抗體,后在熒光顯微鏡下分別選擇兩種相應的激發(fā)濾片觀察,從而對兩種抗原 進行定位和定量。使用此法應注意兩種特異性抗體必須來源于不同種屬,且熒光標記第二抗體的種屬必須與抗體的種屬相匹配。
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