項(xiàng)目 | Western Blot實(shí)驗(yàn) |
實(shí)驗(yàn)原理 | 該技術(shù)是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合原理來檢測(cè)復(fù)雜樣品中的某種蛋白質(zhì)。通過聚丙烯酰胺凝膠電泳分離細(xì)胞或者組織樣本中的蛋白，經(jīng)轉(zhuǎn)膜、封閉后目標(biāo)蛋白與特有性一抗結(jié)合，再與辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色，分析曝光條帶的位置和灰度分析獲知目標(biāo)蛋白在樣本中的表達(dá)情況 |
應(yīng)用 | ·廣泛應(yīng)用于蛋白表達(dá)水平檢測(cè) ·鑒定某種蛋白質(zhì)，也可以對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行定量和半定量的分析 ·可用于蛋白-蛋白、蛋白-DNA和蛋白-RNA相互作用的后續(xù)分析 |
優(yōu)點(diǎn) | ·所需要的設(shè)備方便，成本低，使用靈活 ·操作簡單，結(jié)果一般比較穩(wěn)定，而且陽性結(jié)果一般較為可靠 ·結(jié)果分析與質(zhì)譜相比較為容易
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Western Blot實(shí)驗(yàn)主要流程：
目前，Western Blot因其便捷的優(yōu)點(diǎn)，加之電泳及電轉(zhuǎn)設(shè)備、抗體和信號(hào)檢測(cè)系統(tǒng)的成熟商品化，多種技術(shù)不斷進(jìn)步共同提高了檢測(cè)的靈敏度，使得Western blot技術(shù)成為幾乎每一個(gè)進(jìn)行蛋白質(zhì)研究的實(shí)驗(yàn)室至關(guān)重要的實(shí)驗(yàn)之一。在一般的實(shí)驗(yàn)室中都能夠進(jìn)行Western blot技術(shù)操作，但在實(shí)驗(yàn)過程中也會(huì)經(jīng)常遇到各種問題。
Western Blot實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常出現(xiàn)的問題及對(duì)策：
實(shí)驗(yàn)問題 | 可能原因 | 推薦辦法 |
目的條帶未顯現(xiàn) | 目的蛋白的表達(dá)量過低 | 提高上樣量，濃縮目的蛋白，采用更高靈敏度的試劑盒 |
使用抗體效價(jià)不足 | 使用新配制的一抗，避免反復(fù)凍融；增加一抗或者二抗?jié)舛?，適當(dāng)延長孵育時(shí)間 |
轉(zhuǎn)膜效率低 | 選擇合適的轉(zhuǎn)膜方式，提高轉(zhuǎn)膜效率 |
非平行、彎曲條帶 | 電泳遷移速度過快或遷移溫度過高 | 調(diào)整電泳設(shè)置如PH值、電壓等，電泳時(shí)降低環(huán)境溫度。 |
背景過高 | 封閉條件不合適 | 延長封閉時(shí)間或更換封閉劑 |
抗體濃度過高 | 降低一抗/二抗?jié)舛炔⒀娱L孵育時(shí)間 |
抗體與封閉劑發(fā)生交叉反應(yīng) | 加溫和去污劑如Tween20。
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我們的服務(wù)優(yōu)勢(shì)：
--針對(duì)不同的蛋白樣品，艾普蒂生物采用不同的蛋白濃度測(cè)定方法（Lowry法或BCA法）
--保證實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量，嚴(yán)格的QC質(zhì)控：利用內(nèi)參準(zhǔn)確定量，同一樣品，蛋白濃度定量值多次實(shí)驗(yàn)間差異小于8%
--不同人員之間可重復(fù)性：保證結(jié)果的準(zhǔn)確性
--完整的技術(shù)服務(wù)，我們能夠提供從基因合成，細(xì)胞轉(zhuǎn)染，載體構(gòu)建，蛋白表達(dá)及純化，蛋白功能研究等技術(shù)服務(wù)
--多年的抗體研究經(jīng)驗(yàn)，對(duì)抗體選擇具有豐富的知識(shí)儲(chǔ)備，能從根源上避免假陽性結(jié)果
更多技術(shù)服務(wù)：
項(xiàng)目名稱服務(wù)
SPF級(jí)Wistar大鼠服務(wù)
SPF級(jí)SD大鼠服務(wù)
SPF級(jí)BalBc小鼠服務(wù)
SPF級(jí)C57小鼠服務(wù)
昆明小鼠服務(wù)
SPF級(jí)ICR小鼠服務(wù)
大小鼠普通籠具及運(yùn)輸費(fèi)服務(wù)
SCID小鼠服務(wù)
NPG小鼠服務(wù)
SPF級(jí)裸鼠服務(wù)
裸鼠特殊籠具及運(yùn)輸費(fèi)服務(wù)
新西蘭家兔(普通級(jí)1.5-2kg)服務(wù)
新西蘭家兔(普通級(jí)2-2.5kg)服務(wù)
新西蘭家兔(普通級(jí)2.5-3kg)服務(wù)
豚鼠(普通級(jí))服務(wù)
動(dòng)物相關(guān)（飼養(yǎng)）服務(wù)
普通環(huán)境大鼠飼養(yǎng)費(fèi)服務(wù)
普通環(huán)境小鼠飼養(yǎng)費(fèi)服務(wù)
普通環(huán)境大鼠飼養(yǎng)費(fèi)（按籠位數(shù)收費(fèi)）服務(wù)
普通環(huán)境小鼠飼養(yǎng)費(fèi)（按籠位數(shù)收費(fèi)）服務(wù)
屏障環(huán)境大鼠飼養(yǎng)費(fèi)服務(wù)
屏障環(huán)境小鼠飼養(yǎng)費(fèi)服務(wù)
屏障環(huán)境大鼠飼養(yǎng)費(fèi)（糖尿?。┓?wù)
屏障環(huán)境小鼠飼養(yǎng)費(fèi)（糖尿?。┓?wù)
屏障環(huán)境大鼠飼養(yǎng)費(fèi)（按籠位數(shù)收費(fèi)）服務(wù)
屏障環(huán)境小鼠飼養(yǎng)費(fèi)（按籠位數(shù)收費(fèi)）服務(wù)
IVC籠位大鼠飼養(yǎng)費(fèi)服務(wù)
IVC籠位小鼠飼養(yǎng)費(fèi)服務(wù)
裸鼠飼養(yǎng)費(fèi)（IVC籠位）服務(wù)
裸鼠IVC單籠飼養(yǎng)費(fèi)用服務(wù)
普通環(huán)境家兔飼養(yǎng)費(fèi)服務(wù)
普通環(huán)境豚鼠飼養(yǎng)費(fèi)服務(wù)
飼料輻照費(fèi)服務(wù)
大小鼠打耳標(biāo)服務(wù)
實(shí)驗(yàn)室服裝消毒及使用費(fèi)服務(wù)
動(dòng)物相關(guān)檢測(cè)（操作動(dòng)作）服務(wù)
體外瘤內(nèi)注射服務(wù)
大鼠灌胃給藥服務(wù)
小鼠灌胃給藥服務(wù)
兔子灌胃給藥服務(wù)
大/小鼠注射藥物/細(xì)胞等費(fèi)用（腹腔注射/皮下注射/滴鼻/涂抹給藥/）服務(wù)
氣管滴注服務(wù)
膏藥敷貼給藥服務(wù)
霧化給藥服務(wù)
灌腸費(fèi)用服務(wù)
大鼠尾靜脈注射服務(wù)
關(guān)鍵字： Western Blot;Western Blot服務(wù);Western Blot技術(shù)服務(wù);
湖北艾普蒂生物工程有限公司（簡稱：艾普蒂）由在國內(nèi)科研試劑領(lǐng)域有著十幾年從業(yè)經(jīng)驗(yàn)的專業(yè)技術(shù)團(tuán)隊(duì)和企業(yè)管理團(tuán)隊(duì)組建而成，專門從事以抗體、蛋白、細(xì)胞、化學(xué)品為核心的試劑產(chǎn)品研發(fā)與銷售。
我們長期聚焦于生命科學(xué)、生物醫(yī)藥、醫(yī)療診斷、分析檢測(cè)等領(lǐng)域，專注于為生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域的客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)。提供生命科學(xué) 試劑、供應(yīng)鏈服務(wù)等，為更多的生命科學(xué)科研工作者提供 專業(yè)、全面、安全、快捷的產(chǎn)品和服務(wù)。產(chǎn)品覆蓋 基因、蛋白、細(xì)胞、組織、動(dòng)物等水平的各種研究。
致力于成長為我國重要的生命科學(xué)試劑和成果轉(zhuǎn)化一體化的領(lǐng)導(dǎo)者、致力于成為中國大型的科研試劑產(chǎn)品供應(yīng)商之一。