豬瘟病毒熒光定量檢測試劑盒——探針法 用于定性檢測豬血液、唾液、鼻腔分泌物、糞便等樣本中的豬病病毒，該豬病以發(fā)熱、皮膚發(fā)紺、淋巴結，腎，胃腸粘膜明顯出血為特征，病情短，死亡率高。
本試劑盒利用實時熒光PCR檢測技術，以豬病病毒基因組中的高度保守序列為靶區(qū)域，設計特異性引物和TaqMan熒光探針，通過PCR擴增實現對豬病病毒核酸的快速檢測。
【主要組成成分】
1. 試劑盒包裝組成
序號 | 組成 | 規(guī)格 | 用量/個反應 |
1 | 2XAvantFast Probe mix | 1支，625μl/支 | 12.5μL |
2 | 引物探針 | 1支，375μl/支 | 7.5μl |
3 | 陽性對照 | 1支，250μl/支 |
|
4 | 陰性對照 | 1支，250μl/支 |
|
【檢驗方法】
一、 使用前準備：
1. 試劑盒中各組分充分解凍并混勻。
2. 核酸提取尤其是針對RNA時采用冷凍高速離心機，操作前請將溫度設定在4℃預冷。
3. 推薦使用進口離心管和帶濾芯移液器頭進行操作，檢測過程中使用不帶熒光物質一次性乳膠手套。
二、 核酸提取（在樣本處理區(qū)進行）：
1. 按照試劑說明書操作
三、 PCR擴增檢測：
1. 配液（在試劑準備區(qū)進行）：取出擴增反應液，室溫融化后充分混勻，短暫離心，并按反應個數分別取反應液和酶按照以下配比配制反應液：（注意應考慮有陽性對照和陰性對照甚至空白對照）
試劑 | 2XAvantFast Probe mix | 引物探針 |
用量（反應個數為ｎ） | 12.5μl×ｎ | 7.5μl×ｎ |
反應液配制時應充分混勻，短暫離心，按20μl/管分裝到PCR反應管中，轉移至樣本處理區(qū)；
2. 加樣（在樣本處理區(qū)進行）：分別加入5μl步驟二中處理好的樣本、陰性對照、陽性對照，蓋好管蓋，轉移至核酸擴增區(qū)；
3. PCR擴增檢測（在核酸擴增區(qū)進行）：
將反應管置于全自動熒光定量PCR儀樣品槽中，熒光通道選Hex，設置擴增反應條件為：
階段 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)次數 |
預變性
| 95℃ | 2min | 1 |
| 變性 | 95℃ | 10s | 40
|
| 退火和延伸 | 60℃ | 30s |
*如果使用ABI系列熒光PCR儀，設置擴增體積為25μl，同時要選擇passive reference和quencher為none的模式。
關鍵字： 豬病;熒光定量;PCR;豬瘟檢測;qPCR;
廣州阿凡提生物技術有限公司是一家專注于動物疫病診斷的高科技企業(yè)。以基因檢測技術為核心，專注于檢測設備及配套試劑的研發(fā)、生產及銷售，致力于為畜牧養(yǎng)殖業(yè)提供便捷、可靠、優(yōu)良的畜禽疫病診斷與防疫檢測設備和試劑。公司產品目前覆蓋納米磁珠法核酸提取儀、全自動酶標儀、大型自動化核酸工作站，配套試劑品種達數百種，主要針對豬瘟、豬藍耳、豬偽狂、新城疫、口蹄疫等近百種獸醫(yī)診斷制品，廣泛應用于全國各級動物疫病預防控制機構、海關、養(yǎng)殖企業(yè)、食品加工企業(yè)、第三方檢測機構、大專院校、科研院所等。阿凡提生物以其"專業(yè)而富有經驗的技術能力""持續(xù)專注的研究開發(fā)"和"實現高品質產品的生產能力"為我們的客戶提供始終如一的優(yōu)質產品與服務。