碧云天生產(chǎn)的農(nóng)桿菌感受態(tài)制備試劑盒(Agrobacterium Competent Cells Preparation Kit)，是一種專門用于農(nóng)桿菌感受態(tài)快速制備的試劑盒。農(nóng)桿菌經(jīng)過本試劑盒處理后，細胞膜的通透性發(fā)生了暫時性的改變，成為能允許外源DNA分子進入的感受態(tài)細胞。
農(nóng)桿菌常生活在植物根表面，依靠由根組織滲透出來的營養(yǎng)物質生存，是一類廣泛存在于土壤中的革蘭氏陰性細菌，常用于基因過表達、敲除、敲減和編輯等轉基因植物的構建。根瘤農(nóng)桿菌Ti質粒上的T-DNA上有8個左右的基因在植物細胞內(nèi)表達，指導合成一種特殊化合物冠癭堿，引起轉化細胞癌變;而發(fā)根農(nóng)桿菌的Ri質粒同樣含有T-DNA,可誘導產(chǎn)生發(fā)狀根，其特征是大量增生高度分支的根系。
本試劑盒適用于絕大多數(shù)常見的農(nóng)桿菌，如GV3101、EHA101、LBA4404和EHA105等根瘤農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumefaciens)或C58C1和Ar.1193等發(fā)根農(nóng)桿菌(Agrobacterium rhizogenes)感受態(tài)細胞的制備。使用本試劑盒可以使感受態(tài)轉化效率達到103-104cfu/μg質粒。但是不同種類農(nóng)桿菌菌種制備出來的感受態(tài)細胞，轉化效率可能有較大差異。此外，對于較小的質粒轉化效率會略高，而對于較大的質粒則轉化效率會略低一些。
本試劑盒操作簡單，細菌培養(yǎng)后僅需1個小時左右即可完成感受態(tài)細胞的制備。
本試劑盒提供了專門用于制備農(nóng)桿菌感受態(tài)的培養(yǎng)液，使感受態(tài)的制備更加便捷。
使用碧云天生產(chǎn)的農(nóng)桿菌感受態(tài)制備試劑盒制備的農(nóng)桿菌感受態(tài)轉化效果參考圖1。
圖1. 使用碧云天農(nóng)桿菌感受態(tài)制備試劑盒制備的農(nóng)桿菌感受態(tài)轉化效果圖。使用本試劑盒制備的感受態(tài)在液氮中速凍后保存在-80℃。取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)放置于室溫片刻，待其部分融化，處于冰水混合狀態(tài)時插入冰浴中。每100 μl感受態(tài)細胞加入0.1μg質粒DNA，用手撥打管底混勻，依次于冰上靜置15min、液氮1-3min、37℃水浴3-5min。 然后在超凈臺中加入500 μl無抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基，28℃振蕩培養(yǎng)2h。4000×g離心1min收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸農(nóng)桿菌沉淀，涂布于含相應抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28-30℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天。GV3101轉化效果見圖1A(轉化效率約為3×103 CFU/μg質粒)，LBA4404轉化效果見圖1B(轉化效率約為1.5×103 CFU/μg質粒)，EHA101轉化效果見圖1C(1×104 CFU/μg質粒)。本產(chǎn)品的實際使用效果會因具體實驗條件、實驗材料等的不同而存在差異，圖中效果僅供參考。
本試劑盒可以分多次使用，共可以制備足夠進行100次轉化的感受態(tài)細胞。
關鍵字： 農(nóng)桿菌感受態(tài);碧云天代理;
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